防己黃柏凝膠抗炎、鎮(zhèn)痛作用的實驗研究.pdf

1、創(chuàng)傷性滑膜炎的病理中心環(huán)節(jié)為血管反應(yīng)，中藥外用治療該病具有確切的療效。但中藥外用制劑普遍存在制備工藝落后，基質(zhì)選用不盡合理，透皮吸收機理研究不透，復(fù)方處方藥味組成龐雜，難以進行機理研究的問題，正逐漸失去市場競爭力，因此，利用現(xiàn)代制劑技術(shù)開發(fā)療效顯著持久，使用方便的外用中藥制劑正成為中藥現(xiàn)代化的一個重要課題。經(jīng)皮給藥系統(tǒng)(TDDS)，是指能夠經(jīng)皮膚給藥而起到全身治療作用的現(xiàn)代外用藥物劑型，可降低藥物毒性和副作用，提高療效，減少給藥次數(shù)，是

2、第三代藥物制劑開發(fā)研究的中心。其劑型之一的凝膠劑是指藥物與能形成凝膠的輔料制成的單一、混懸或乳劑型的乳膠稠厚液體或半固體制劑，具有制法簡單，使用舒適的優(yōu)點。遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院即應(yīng)用中藥驗方外用治療創(chuàng)傷性滑膜炎，其主藥為具有利水消腫作用的防己和清熱燥濕作用的黃柏。本課題中處方即由以上兩種藥物組成，并對應(yīng)用現(xiàn)代制劑技術(shù)將其研制開發(fā)成的中藥復(fù)方凝膠進行藥效學(xué)和藥理學(xué)研究，為臨床應(yīng)用提供實驗依據(jù)。 實驗材料與方法: 1、實驗

3、動物Wistar大鼠，150±20g；昆明小鼠，20±2g。 2、主要儀器及試劑防己黃柏凝膠(自制)、扶他林乳膏，角叉菜膠、伊文思藍、醋酸、巴豆油合劑。751紫外可見分光光度計、角膜環(huán)鉆、電子天平。 3、實驗方法 (1)小鼠熱板法鎮(zhèn)痛實驗：取雌性小鼠，放入55±0.5℃熱板水浴中，以舔后足作為疼痛反應(yīng)指標，預(yù)測小鼠痛閾值。以5s<痛閾值<30s視為合格小鼠，將痛閾合格的40只小鼠隨機分為等劑量的賦形劑對照組(2g

4、/kg)；陽性對照藥扶他林乳膏組(0.4g/kg)；防己黃柏凝膠小劑量組(0.04g生藥/20g)；中劑量組(0.08g生藥/20g)；大劑量組(0.12g生藥/20g)；將藥物涂于小鼠背部，面積為1cm2，每天給藥1次，連續(xù)給藥7天。末次給藥后0.5h，1h，1.5h分別測定痛閾值。 (2)小鼠扭體法鎮(zhèn)痛實驗：取體重18～22g健康小鼠40只，雌雄各半，分組及給藥方法同上。于第8天腹腔注射0.6％醋酸0,2ml/20g，同時用

5、秒表計時，記錄小鼠出現(xiàn)第1次扭體反應(yīng)的時間(即潛伏期)及15min內(nèi)各鼠的扭體次數(shù)。計算藥物鎮(zhèn)痛的百分率。 (3)對小鼠毛細血管通透性影響的實驗：動物模型、分組及給藥方法同上。第7天，每只小鼠尾靜脈注射1％伊文思藍0.1ml/20g，并同時腹腔注射0.6％醋酸0.2ml/20g，20min后斷頭處死，剪開腹腔，用5ml蒸餾水沖洗腹腔3次，用吸管吸取腹腔洗出液約4ml，1000r/min離心5min，取上清液3ml，在751紫外可

6、見分光光度計590nm處測定吸收度(OD值)。 (4)小鼠巴豆油耳腫脹實驗：取健康18～22g雄性小鼠40只，分組與給藥方法同上。第8天每只小鼠右耳廓前后均勻涂布當日配制的巴豆油合劑，0.05ml/20g，致炎30min后將小鼠脫頸椎處死，用直徑8mm的角膜環(huán)鉆切下左右耳廓，分別在電子天平上稱重后，計算耳腫脹率。 (5)對大鼠白細胞游走影響的實驗：取雄性Wistar種大鼠40只，體重150±20g，隨機分為等劑量賦形劑組

7、(0.3g/150g)；扶他林對照組(0.4g/kg)：防己黃柏凝膠小劑量組(0.3g生藥/150g)；中劑量組(0.6g生藥/150g)；大劑量組(0.9g生藥/150g)。大鼠背部脫毛面積為4cm<'2>，在脫毛部位涂布凝膠，每天1次，連續(xù)給藥7天，第8天用乙醚麻醉大鼠，左側(cè)胸腔注入1％角叉菜膠Carrageenan(25mg/kg)，4h后處死，剖開胸腔，用吸管吸取胸腔滲出液20μl，加入0.38ml的白細胞稀釋液中，按白細胞記數(shù)

8、法計數(shù)胸腔液中白細胞的數(shù)量。 (6)抑制大鼠足跖炎癥組織釋放的PGE<,2>的量動物模型的建立、分組與給藥方法同上。末次給藥30min后，每只大鼠右后足跖皮下注射角叉菜膠0.1ml，致炎4h后處死大鼠，在踝關(guān)節(jié)上5mm處剪下炎性腫脹足，稱量重量，生理鹽水5ml浸泡1h，取出足爪。離心浸泡液，吸取上清液0.1ml，加0．5mol·L<'-1>KOH-甲醛溶液2ml，在50℃水浴下異構(gòu)20min，加甲醛5ml，用751紫外可見分光光

9、度計于278nm處測定其吸收度(OD值)。以每克炎性組織相當?shù)奈斩戎当硎綪GE<,2>的量。 (7)統(tǒng)計學(xué)方法統(tǒng)計數(shù)據(jù)以x±SD表示，統(tǒng)計方法用Dunnett檢驗法。 結(jié)論: 1、防己黃柏凝膠能提高小鼠痛閾值，延長小鼠疼痛潛伏期，具有鎮(zhèn)痛作用。 2、防己黃柏凝膠能降低小鼠毛細血管通透性，減少炎性介質(zhì)的滲出，能抑制炎癥反應(yīng)，降低白細胞數(shù)目，具有抗炎作用。 3、防己黃柏凝膠可降低炎癥組織中釋放的PG