脈絡(luò)寧對老年癡呆早期模型大鼠顳葉皮層膽堿能受體表達(dá)的影響.pdf

1、目的：
　　 以去卵巢同時注射D-半乳糖的大鼠為老年性癡呆早期模型，觀察脈絡(luò)寧，維生素（C+E），中藥復(fù)方（謝海洲方）對大鼠顳葉皮層膽堿能受體，雌激素受體及谷氨酸受體表達(dá)的影響。
　　 方法：
　　 1、實(shí)驗(yàn)分組
　　 選用4月齡雌性SD大鼠40只，隨機(jī)分為2組：假手術(shù)組（Sham組）、去卵巢組（OVX組），其中Sham組8只、OVX組32只。Sham組為雙側(cè)去除少量卵巢上脂肪組織，OVX組為去除雙側(cè)卵巢

2、。手術(shù)后2周Sham組給予生理鹽水0.5ml/d，腹腔注射；OVX組給予D-半乳糖20 mg·0.5ml/d，腹腔注射。注射6周后將OVX組隨機(jī)分為4組：脈絡(luò)寧組（ODM），V.C+V.E組（ODV），謝海洲方組（ODZ）及病理對照組（OD），每組8只。各組均灌胃4周，灌胃劑量如下：ODM組脈絡(luò)寧注射液1.8 ml/Kg.d，ODZ組謝海洲方16.83g/Kg.d， ODV組V.C45mg/Kg.d V.E27 mg/Kg.d，Sham

3、組及OD組蒸餾水1.5ml/Kg.d。灌胃過程中OVX組及Sham組繼續(xù)給予D-半乳糖及生理鹽水注射。手術(shù)后常規(guī)喂養(yǎng)12周后處死。
　　 2、行為學(xué)測試
　　 注射D-半乳糖四周后，用Morris水迷宮對所有大鼠進(jìn)行訓(xùn)練，每天4次，每次間隔5分鐘，共四天，做為學(xué)習(xí)記憶訓(xùn)練。注射D-半乳糖六周后進(jìn)行Morris水迷宮測試，一天內(nèi)測試4次，每次間隔5分鐘，共測試一天。以后三次逃避潛伏期（escape latency）的平均值

4、作為評價大鼠學(xué)習(xí)記憶能力的指標(biāo)。動物處死前一天，同樣條件水迷宮1天，方法同上，記錄大鼠逃避潛伏期的平均值，作為評價大鼠空間記憶能力的指標(biāo)。
　　 3、組織標(biāo)本的獲取及指標(biāo)測定
　　 3.1組織標(biāo)本的獲取
　　 麻醉大鼠，開顱并迅速分離顳葉皮層置于液氮中，于-80℃低溫冰箱保存，用于組織總RNA的提取。
　　 3.2 mRNA的測定
　　 用Trizol法提取顳葉皮層組織總RNA。用β-actin作

5、為內(nèi)參照，RT-PCR法測定顳葉皮層α2-7nAChR，M1-5 mAchR，ERα，ERβ，NMDAR1的相對表達(dá)量。
　　 結(jié)果：
　　 1、大鼠學(xué)習(xí)記憶能力的變化
　　 各訓(xùn)練組大鼠逃避潛伏期隨訓(xùn)練次數(shù)增加而縮短，取最后三次逃避潛伏期的平均值進(jìn)行觀察，OVX+D-gal組逃避潛伏期明顯長于Sham組（P<0.05）；給藥后，ODM+ODV+ODZ組逃避潛伏期明顯短于OD組（P<0.05），差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義

6、。
　　 2、大鼠顳葉皮層α7nAchR mRNA水平的變化
　　 OD組的α7nAChR mRNA的相對表達(dá)量比Sham組明顯降低（P<0.05），差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；與OD組相比，ODM組和ODV組的α7nAChR mRNA相對表達(dá)量明顯升高（P<0.05），ODZ組的α7nAChR mRNA相對表達(dá)量與OD組相比無明顯差異（P>0.05）。
　　 3、大鼠顳葉皮層M1mAchR mRNA水平的變化
　

7、　 OD組M1mAchR mRNA相對表達(dá)量比Sham組明顯升高（P<0.05），差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；與OD組相比，ODZ組M1mAchR mRNA相對表達(dá)量明顯降低（P<0.05）；ODM組，ODV組M1mAchR mRNA相對表達(dá)量與OD組相比無明顯差異（P>0.05）；ODM組，ODV組，ODZ組與Sham組相比M1mAchR mRNA相對表達(dá)量無明顯差異（P>0.05）。
　　 4、大鼠顳葉皮層M3mAchR mRNA

8、水平的變化
　　 OD組的M3mAchR mRNA相對表達(dá)量比Sham組明顯降低（P<0.05），差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；與OD組相比，ODM組，ODV組，ODZ組的M3mAchR mRNA相對表達(dá)量明顯升高（P<0.05）；ODM組，ODV組，ODZ組的M3mAchR mRNA相對表達(dá)量與Sham組無明顯差異（P>0.05）。
　　 5、大鼠顳葉皮層ERα mRNA水平的變化
　　 OD組ERα mRNA相對表達(dá)量

9、比Sham組明顯降低（P<0.05），差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；與OD組相比，ODM組ERα mRNA相對表達(dá)量明顯升高（P<0.05），ODV組，ODZ組ERα mRNA相對表達(dá)量與OD組無明顯差異（P>0.05）；ODM組ERα mRNA相對表達(dá)量與Sham組相比無明顯差異（P>0.05）。
　　 6、大鼠顳葉皮層NMDAR1mRNA水平的變化
　　 OD組NMDAR1 mRNA相對表達(dá)量比Sham組明顯降低（P<0.05

10、），差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義：與OD組相比，ODM組，ODV組，ODZ組NMDAR1 mRNA相對表達(dá)量明顯升高（P<0.05）；ODM組，ODV組，ODZ組NMDAR1mRNA相對表達(dá)量比Sham組明顯升高（P<0.05）。
　　 結(jié)論：
　　 1、去卵巢同時注射D-半乳糖后引起大鼠學(xué)習(xí)記憶能力下降，檢測基因表達(dá)的結(jié)果發(fā)現(xiàn)：本模型大鼠顳葉皮層α7nAChR mRNA，M1mAchR mRNA，M3mAchR mRNA，ERα

11、 mRNA NMDAR1mRNA表達(dá)發(fā)生了變化，這些變化與AD某些病理變化相一直。
　　 2、脈絡(luò)寧，維生素（C+E），謝海洲方可以改善去卵巢同時注射D-半乳糖大鼠學(xué)習(xí)記憶能力的衰退，并且可以調(diào)節(jié)α7nAChR mRNA，M1mAchR mRNA，M3mAchR mRNA，ERα mRNA，NMDAR1 mRNA的表達(dá)，提示脈絡(luò)寧，維生素（C+E），謝海洲方可能是通過直接或間接調(diào)節(jié)上述受體的表達(dá)來發(fā)揮神經(jīng)保護(hù)作用，這其中脈絡(luò)寧的