影像學(xué)監(jiān)測(cè)動(dòng)脈粥樣硬化他汀抗炎治療的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、本文對(duì)影像學(xué)監(jiān)測(cè)動(dòng)脈粥樣硬化他汀抗炎治療進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)研究。本研究分為三個(gè)部分：
　　 第一部分：兔動(dòng)脈粥樣硬化模型建立和阿托伐他汀耐受劑量探索。
　　 目的：建立兔髂動(dòng)脈粥樣硬化(AS)模型，探討3T核磁共振成像平掃對(duì)AS病變形態(tài)學(xué)成像的可行性，并摸索兔對(duì)阿托伐他汀治療的耐受劑量。
　　 方法：40只雄性新西蘭兔分為造模組(n=24)和阿托伐他汀劑量探索組(n=16)。所有兔在高脂飲食前(基線)測(cè)定血清總膽固醇(T

2、C)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL)、低密度脂蛋白(LDL)。其后，1)造模組：在基線時(shí)進(jìn)行3T MR和超聲掃描，之后采用高脂飲食聯(lián)合右髂動(dòng)脈內(nèi)膜球囊剝脫術(shù)進(jìn)行造模。術(shù)后4周查血脂、超聲掃描，8周查血脂、超聲、MRI掃描。MRI結(jié)束后24小時(shí)內(nèi)處死動(dòng)物取左右髂動(dòng)脈進(jìn)行HE、免疫組化染色。對(duì)HE染色與MR的T2加權(quán)圖像進(jìn)行形態(tài)學(xué)比較。超聲及彩色多普勒檢查對(duì)左右髂動(dòng)脈直徑及血液流速進(jìn)行比較。對(duì)右側(cè)受損髂動(dòng)脈管壁厚度進(jìn)行HE與MRI

3、測(cè)量結(jié)果的相關(guān)性比較。2)阿托伐他汀劑量摸索組：16只兔分為小劑量和大劑量量組，每組8只，小劑量組再分為1mg/kg/d，2.5mg/kg/d兩個(gè)亞組，大劑量組分為5mg/kg/d和10mg/kg/d兩個(gè)亞組，高脂飼養(yǎng)，第4周、第8周末稱體重、查血脂、肝功能，觀察進(jìn)食及存活耐受等情況并進(jìn)行肝臟組織學(xué)比較。
　　 結(jié)果：①造模組右側(cè)髂動(dòng)脈成功建立起粥樣硬化斑塊模型，具有以脂質(zhì)沉積為主要特征的斑塊，斑塊內(nèi)有大量巨噬細(xì)胞侵潤(rùn)。右側(cè)髂動(dòng)

4、脈管腔面積明顯小于左側(cè)髂動(dòng)脈，其管壁厚度與管壁面積均明顯大于左側(cè)髂動(dòng)脈；單純高脂飲食8周對(duì)左側(cè)髂動(dòng)脈未能造成明顯粥樣硬化病變；T2加權(quán)圖像上測(cè)量的管壁厚度與組織學(xué)有較高相關(guān)性；右髂動(dòng)脈SSI測(cè)量8周時(shí)高于基線，提示管壁內(nèi)炎癥存在。超聲監(jiān)測(cè)右側(cè)髂動(dòng)脈內(nèi)徑隨損傷后時(shí)間延伸而進(jìn)行性狹窄，血流速度在8周時(shí)明顯上升。②小劑量組8只兔全部存活，大劑量組死亡6只(10mg/kg組全部死亡)；血脂升高程度大劑量組明顯減緩，但肝功能受損嚴(yán)重。死亡兔肝臟病

5、理檢查提示大量肝細(xì)胞壞死。
　　 結(jié)論：⑴高脂飲食+球囊內(nèi)膜損傷能夠建立良好的兔粥樣硬化斑塊模型。該模型中有巨噬細(xì)胞大量浸潤(rùn)，為判斷斑塊是否為易損性提供了良好的平臺(tái)。⑵3T高分辨率MR成像對(duì)血管形態(tài)學(xué)的判斷與病理有高度相關(guān)性。⑶超聲對(duì)兔髂動(dòng)脈血管腔的狹窄、血流速度的變化可以提供良好的信息。⑷大劑量阿托伐他汀可以降低高脂飲食導(dǎo)致的血脂上升程度，但本研究中兔對(duì)大劑量阿托伐他汀的耐受性存在問(wèn)題。
　　 第二部分：USPIO增強(qiáng)

6、MRI評(píng)價(jià)他汀抗粥樣硬化炎癥的實(shí)驗(yàn)研究。
　　 目的：探討USPIO增強(qiáng)磁共振評(píng)估他汀治療對(duì)動(dòng)脈硬化斑塊內(nèi)炎癥的干預(yù)作用，為早期發(fā)現(xiàn)粥樣硬化病變及易損斑塊提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 方法：30只雄性新西蘭大白兔(體重2.0-2.5kg)隨機(jī)分為對(duì)照組(15只)和治療組(15只)，對(duì)兔右髂動(dòng)脈進(jìn)行球囊內(nèi)膜損傷手術(shù)，予以高脂飲食，治療組同時(shí)加阿托伐他汀2.5mg/kg/d；術(shù)前和術(shù)后8周在3.0T、MR上進(jìn)行掃描，第8周平掃后靜脈

7、注射超微超順磁性納米氧化鐵顆粒(USPIO)5mg/kg，注射后24小時(shí)、72小時(shí)增強(qiáng)掃描。所有兔均在第8周MRI72小時(shí)增強(qiáng)掃描后進(jìn)行血管造影；造影后處死，取標(biāo)本進(jìn)行病理切片檢查，包括HE染色和免疫組化(抗巨噬細(xì)胞RAM-11)和普魯士藍(lán)染色；并留取部分標(biāo)本進(jìn)行掃描電鏡和透射電鏡檢查。所有兔在基線、4周和8周時(shí)抽血檢查血脂、肝功能和CRP。
　　 結(jié)果：治療組血脂、CRP升高程度明顯低于對(duì)照組。MR顯示術(shù)前兩組兔右髂動(dòng)脈內(nèi)壁光

8、整，周圍間隙清晰，T2WI示動(dòng)脈壁信號(hào)均勻、沒(méi)有明顯差異。術(shù)后8周MR平掃發(fā)現(xiàn)兩組血管內(nèi)壁毛糙不光整，T2WI信號(hào)升高，血管周圍間隙有水腫，治療組T2WI信號(hào)上升程度低于對(duì)照組。USPI0增強(qiáng)后24h對(duì)照組管壁局部可見(jiàn)小點(diǎn)狀斑片狀信號(hào)缺失，相應(yīng)位置平掃時(shí)的T2WI信號(hào)相對(duì)較高，治療組信號(hào)缺失區(qū)域不明顯。病理顯示兩組兔HE染色均顯示內(nèi)膜受損，對(duì)照組泡沫細(xì)胞明顯，可見(jiàn)易損斑塊，免疫組化抗巨噬細(xì)胞(RAM-11)陽(yáng)性率明顯高于治療組；普魯士藍(lán)

9、染色陽(yáng)性率高，而治療組不明顯。對(duì)照組管腔面積明顯小于治療組，內(nèi)膜增厚；易損斑塊發(fā)生率明顯高于治療組。血管造影和MRA發(fā)現(xiàn)兩組兔均有顯著狹窄，嚴(yán)重狹窄發(fā)生率兩組沒(méi)有顯著差異。掃描電鏡檢查發(fā)現(xiàn)對(duì)照組血管內(nèi)膜表面有較多蠟狀脂質(zhì)，透射電鏡發(fā)現(xiàn)對(duì)照組受損側(cè)髂動(dòng)脈泡沫細(xì)胞含量增多，內(nèi)有高密度顆粒狀鐵顆粒。
　　 結(jié)論：⑴USPIO可被粥樣硬化斑塊中的巨噬細(xì)胞吞噬并造成MRI T2WI信號(hào)下降，有助于判斷斑塊的穩(wěn)定性。⑵血管造影及MRA可以發(fā)

10、現(xiàn)血管狹窄，但對(duì)病變活動(dòng)性判斷有局限。⑶阿托伐他汀治療能夠穩(wěn)定動(dòng)脈粥樣硬化斑塊，其部分機(jī)制可能是其多效性中的抗炎、抑制巨噬細(xì)胞的功能。
　　 第三部分：USPIO增強(qiáng)成像觀察他汀預(yù)治療對(duì)急性血管損傷的保護(hù)作用。
　　 目的：探討利用USPIO增強(qiáng)磁共振(MR)評(píng)估他汀短期預(yù)治療對(duì)急性血管球囊內(nèi)膜損傷的保護(hù)作用
　　 方法：16只實(shí)驗(yàn)兔高脂飼料喂養(yǎng)前，查血脂、CRP后隨機(jī)分為治療組和對(duì)照組兩組，治療組給予每日5mg

11、/kg阿托伐他汀加高脂飲食，對(duì)照組單單給予高脂飲食；兩周后行兩組動(dòng)物行右髂動(dòng)脈內(nèi)膜球囊損傷術(shù)。手術(shù)開(kāi)始時(shí)抽血測(cè)血脂、CRP。手術(shù)結(jié)束前兩組注射USP105mg/kg。手術(shù)前48小時(shí)內(nèi)、手術(shù)后24小時(shí)、72小時(shí)對(duì)所有兔進(jìn)行MR掃描。72小時(shí)MR掃描結(jié)束后24小時(shí)內(nèi)進(jìn)行血管造影。治療組手術(shù)后3天內(nèi)繼續(xù)給予阿托伐他汀治療。造影結(jié)束后處死進(jìn)行組織病理學(xué)、免疫組化、普魯士藍(lán)染色。
　　 結(jié)果：阿托伐他汀5mg/kg治療兩周余的高脂飲食兔的

12、血脂和CRP升高程度顯著低于對(duì)照組；術(shù)前兩組兔MR髂動(dòng)脈平掃沒(méi)有差異，術(shù)后24小時(shí)兩組兔USPIO增強(qiáng)掃描顯示局部信號(hào)均有所上升，治療組上升幅度明顯低于對(duì)照組，術(shù)后72小時(shí)兩組信號(hào)均有所降低，但對(duì)照組依然明顯高于治療組。其中對(duì)照組管壁部分區(qū)域可見(jiàn)小點(diǎn)狀片狀信號(hào)下降或信號(hào)缺失，而治療組管壁信號(hào)缺失不明顯。MRA與術(shù)后血管造影兩組兔血管未見(jiàn)明顯差異。免疫組化顯示對(duì)照組接近內(nèi)膜撕脫處有巨噬細(xì)胞浸潤(rùn)，普魯士蘭染色陽(yáng)性，而治療組不明顯。