鈉鈣交換器NCX1在肝細(xì)胞癌中的表達(dá)及其作用.pdf

1、目的：鈣離子是細(xì)胞內(nèi)重要的信號(hào)分子，它參與調(diào)節(jié)多種細(xì)胞的生理、生化過(guò)程，在維持機(jī)體的正常生理功能中發(fā)揮著重要作用，而細(xì)胞內(nèi)鈣離子平衡的紊亂是導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞的惡性轉(zhuǎn)化及惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展的重要原因。鈉鈣交換器(Sodium-calcium exchanger，NCX)是一種存在于細(xì)胞膜上的雙向轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白，在許多組織細(xì)胞中廣泛表達(dá)，在維持細(xì)胞內(nèi)Ca2+的平衡中起著重要作用。近年來(lái)有研究發(fā)現(xiàn)，NCX1涉及了胰腺癌的發(fā)生、發(fā)展，但有關(guān)NCX1在肝

2、細(xì)胞癌的發(fā)生與發(fā)展中的作用，至今未見(jiàn)報(bào)道。
　　 本實(shí)驗(yàn)旨在研究NCX1在原發(fā)性肝細(xì)胞癌中的表達(dá)及其在調(diào)控肝細(xì)胞癌細(xì)胞內(nèi)鈣離子變化中的作用，以及如何影響肝癌細(xì)胞的增殖，希望能夠發(fā)現(xiàn)導(dǎo)致肝細(xì)胞癌發(fā)生及發(fā)展的關(guān)鍵調(diào)控分子，從而為原發(fā)性肝癌的治療提供新的藥物靶點(diǎn)。
　　 方法：體外培養(yǎng)人正常的肝細(xì)胞株LO2及肝癌細(xì)胞株HepG2和Bel-7404，同時(shí)選取人正常的肝組織和原發(fā)性肝細(xì)胞癌患者手術(shù)切除的癌組織，分別運(yùn)用RT-PCR

3、技術(shù)及Western-Blot技術(shù)檢測(cè)NCX1mRNA和蛋白質(zhì)的表達(dá)情況。采用共聚焦顯微鏡技術(shù)測(cè)定正常肝細(xì)胞及肝癌細(xì)胞在靜息狀態(tài)下細(xì)胞內(nèi)的鈣離子濃度，比較正常肝細(xì)胞及肝癌細(xì)胞分別給予細(xì)胞外無(wú)鈉溶液刺激及特異性的阻斷劑阻斷后細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度的變化情況。采用MTT比色法觀察NCX1特異性的阻斷劑KB-R7943對(duì)人肝癌細(xì)胞增殖的影響。
　　 結(jié)果：
　　 (1)人正常肝細(xì)胞株LO2及肝組織、肝癌細(xì)胞株HepG2、Bel-74

4、04及肝細(xì)胞癌組織中均有NCX1mRNA的表達(dá)，且在肝癌細(xì)胞株HepG2及Bel-7404中NCX1mRNA的表達(dá)高于正常肝細(xì)胞株LO2(P<0.05)，但在正常肝組織及癌組織中NCX1mRNA的表達(dá)無(wú)明顯差異(P>0.05)。
　　 (2)NCX1的蛋白質(zhì)在細(xì)胞膜上與細(xì)胞漿中都有表達(dá)，且肝癌細(xì)胞株及肝細(xì)胞癌組織中NCX1蛋白質(zhì)的表達(dá)均高于正常肝細(xì)胞株及正常肝組織(P<0.05)。
　　 (3)正常肝細(xì)胞LO2和肝癌細(xì)胞

5、HepG2及Bel-7404細(xì)胞內(nèi)鈣離子檢測(cè)情況：共聚焦顯微鏡測(cè)得在給予細(xì)胞外無(wú)鈉溶液可激活NCX1，LO2，HepG2及Bel-7404細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度均增高，但肝癌細(xì)胞HepG2及Bel-7404細(xì)胞內(nèi)鈣離子增高的幅值明顯高于LO2細(xì)胞(P<0.05)，而當(dāng)給予NCX1特異性阻斷劑KB-R7943(10μmol/L)時(shí)，則能夠顯著阻斷三株細(xì)胞細(xì)胞外無(wú)鈉誘導(dǎo)的胞內(nèi)鈣離子升高的幅度。
　　 (4)MTT比色法觀察到NCX1特異性