NDRG1在原發(fā)性肝細胞癌中的亞細胞表達及其功能的初步研究.pdf

1、背景及目的:
　　在世界范圍內，肝癌是男性腫瘤發(fā)病率排名第五位、女性腫瘤發(fā)病率排名第七位的惡性腫瘤，而其致死率分別排在男女性腫瘤致死率的第二位和第六位，其中肝細胞癌是最常見的組織學類型，占肝癌總數的70％～85％。肝癌早期癥狀隱匿，診斷率低，預后較差，術后復發(fā)和轉移常見，所以臨床上迫切需要合適的預測肝癌進展的生物標志物。據報道，NDRG1是一個和腫瘤發(fā)生發(fā)展相關的具有多效性功能的蛋白，有趣的是，在肝癌的研究中，NDRG1竟被賦予兩

2、種不同的角色，我們的研究探討了NDRG1蛋白在肝癌中的表達情況及其亞細胞定位特點并通過體外實驗初步驗證NDRG1表達對肝癌細胞生物學功能的影響，最后我們利用PCRarray實驗初步確定了與NDRG1功能發(fā)揮相關的基因。
　　方法:
　　1、通過肝癌組織芯片免疫組織化學技術，研究NDRG1在肝癌及癌旁細胞中的表達情況及定位，并著重分析NDRG1亞細胞定位與肝癌臨床病理學特點的關系，探討NDRG1在肝癌發(fā)生進展巾的表達特點。

3、r>　　2、構建NDRG1-shRNA，敲除肝癌細胞株BEL7402細胞中NDRG1基因的表達，采用qPCR和westernblot技術檢測干擾效果。
　　3、應用transwell小室和劃痕實驗檢測NDRG1基因敲除后BEL7402細胞侵襲和運動能力的變化。
　　4、應用cellcountingkit-8(CCK8)試劑盒測定干擾前后BEL7402細胞增殖能力的變化。
　　5、應用流式細胞技術檢測BEL7402細胞凋

4、亡水平的變化。
　　6、應用PCRarray實驗驗證NDRG1基因敲除后BEL7402細胞中與腫瘤轉移相關基因的表達變化。
　　結果:
　　1、NDRG1蛋白在正常肝細胞中不表達，在肝癌細胞中呈現高表達狀態(tài)，而且NDRG1蛋白表達的亞細胞定位與其臨床病理學特點密切相關。NDRG1蛋白主要在肝癌細胞漿中表達，且其表達高低與TNM分期呈現負相關(P＜0.01)，即隨著原發(fā)腫瘤累及范圍及程度增加，NDRG1胞漿表達降低。ND

5、RG1在肝癌細胞胞膜上的表達明顯高于其在癌旁細胞胞膜上的表達，且差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)。
　　2、NDRG1基因敲除后，其在BEL7402細胞中的表達明顯降低，且NDRG1表達降低對BEL7402細胞形態(tài)無明顯影響。
　　3、NDRG1基因敲除顯著增強了BEL7402細胞的侵襲和運動能力，且差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)。
　　4、NDRG1基因敲除后，BEL7402細胞增殖能力顯著增強，差異有統(tǒng)計學意義(

6、P＜0.01)。
　　5、NDRG1基因敲除后，BEL7402細胞凋亡水平顯著增高，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)。
　　6、NDRG1基因敲除后BEL7402細胞中CTSL1、IL-1β、ITGB3、MMP10、SERPINE1等基因的表達顯著升高，而MMP13、TNFSF10的表達則顯著降低。
　　結論:
　　1、本研究分析了NDRG1在肝癌細胞中的表達特點，并首次討論了NDRG1蛋白亞細胞定位與肝癌臨床病

7、理學特點的相關性。NDRG1在肝癌細胞中的表達相比正常肝細胞中明顯升高，亞細胞表達分析發(fā)現其在肝癌細胞胞漿中的表達與原發(fā)腫瘤累及范圍和程度呈負相關性，且在肝癌細胞胞膜上的表達明顯高于其在正常肝細胞胞膜上的表達。
　　2、通過驗證NDRG1基因敲除后對體外肝癌細胞株BEL7402細胞的生物學功能的影響，我們發(fā)現NDRG1能夠抑制細胞增殖，抑制細胞凋亡，且能夠抑制細胞的侵襲和運動能力。
　　3、PCRarray實驗證實，NDRG