Ang-Tie2信號(hào)鏈在高糖誘導(dǎo)的腹膜血管新生中的作用研究.pdf

1、高濃度葡萄糖（高糖）是腹膜透析（腹透）液最重要的非生物相容性因素。研究表明高糖透析液的使用與腹透患者腹膜血管新生有著密切的關(guān)系，但高糖引起腹膜血管新生的機(jī)制尚不明了。血管生成素/酪氨酸激酶受體2（Angiopoietin/ tyrosine kinase receptor 2，Ang/Tie2）信號(hào)是調(diào)控血管新生的主要通路之一，然而其在腹膜組織血管新生中的作用卻鮮為人知。本文以人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（Human umbilical vascu

2、lar endothelial cells，HUVECs）為研究對(duì)象，觀察高糖對(duì)HUVECs 血管新生能力的影響，研究高糖對(duì)HUVECsAng/Tie2信號(hào)表達(dá)的影響，并進(jìn)一步研究阻斷Ang/Tie2對(duì)HUVECs血管新生能力的影響，以探討Ang/Tie2信號(hào)在高糖誘導(dǎo)的腹膜血管新生中的作用。
　　 本研究將HUVECs分為以下三組:正常對(duì)照組、高糖（1.5％葡萄糖）組和高滲（1.5％甘露醇）組。采用MTT法觀察細(xì)胞增殖，流式細(xì)

3、胞術(shù)分析細(xì)胞周期，細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)和管狀結(jié)構(gòu)形成能力來觀察HUVECs的血管新生能力；采用Real-time PCR、Western blot、ELISA檢測(cè)Ang/Tie2信號(hào)的表達(dá)變化；采用可溶性Tie2融合蛋白（sTie2-Fc）阻斷Ang/Tie2以探討對(duì)HUVECs的血管新生能力的影響。
　　 本文的第一部分研究結(jié)果顯示，與正常對(duì)照組相比，1.5％葡萄糖和1.5％甘露醇刺激HUVECs 6h、12h均能顯著刺激內(nèi)皮細(xì)胞的增

4、殖（P 均<0.05）。
　　 1.5％葡萄糖和1.5％甘露醇刺激HUVECs 6h，均能顯著增加HUVECs進(jìn)入S期的細(xì)胞數(shù)目（P 均<0.05），延長刺激時(shí)間至12h不能延長這一作用。與對(duì)照組相比，細(xì)胞遷移功能和管狀結(jié)構(gòu)形成能力檢測(cè)顯示，1.5％葡萄糖和1.5％甘露醇刺激HUVECs 12h后遷移細(xì)胞的數(shù)量顯著增加（1.5％ 葡萄糖 vs 對(duì)照組, 236±17.1 vs169.2±7.7, p<0.05 ； 1.5％甘露醇

5、vs對(duì)照組 ,238.6±15.5vs169.2±7.7 ，p<0.05），管狀結(jié)構(gòu)形成明顯增多（1.5％葡萄糖vs對(duì)照組, 17.4±1.82vs9.8±1.30 ，p<0.05 ；1.5％甘露醇vs對(duì)照組,14.4±1.67vs9.8±1.30，p<0.05），并且1.5％葡萄糖引起的HUVECs管狀結(jié)構(gòu)形成數(shù)目多于1.5％甘露醇（1.5％ 葡萄糖vs1.5％甘露醇, 17.4±1.82vs14.4±1.67, p<0.05）。

6、r>　　 第二部分研究中，我們觀察到刺激HUVECs 6h，1.5％葡萄糖能顯著上調(diào)Ang2 mRNA的表達(dá)（P<0.05），而1.5％甘露醇對(duì)Ang2 mRNA的表達(dá)沒有明顯影響。延長刺激時(shí)間至12h，1.5％葡萄糖和1.5％甘露醇刺激的HUVECs 的Ang2 mRNA的表達(dá)較正常對(duì)照組顯著降低（P<0.05）。 1.5％葡萄糖刺激HUVECs 6h和12h均明顯增加Ang2分泌量（6h1.5％葡萄糖vs對(duì)照組,6066±837v

7、s4648±676pg/ml，p<0.05；12h 1.5％葡萄糖vs對(duì)照組,11321±1141vs7255±317 pg/ml，p<0.05）；1.5％甘露醇刺激HUVECs 6h Ang2分泌量沒有明顯增加（6h 1.5％ 甘露醇 vs 對(duì)照組, 5160±1322 vs 4648±676pg/ml，p>0.05），刺激12h Ang2 的分泌量明顯增加（12h 1.5％甘露醇vs 對(duì)照組, 10560±529vs 7255±31

8、7pg/ml，p<0.05）。1.5％葡萄糖和1.5％甘露醇刺激HUVECs 6h后，Tie2mRNA的表達(dá)均明顯升高（P 均<0.05），延長刺激時(shí)間至12h Tie2 mRNA表達(dá)較正常對(duì)照組沒有差異。1.5％葡萄糖和1.5％甘露醇刺激HUVECs 6h和12h，Tie2蛋白的表達(dá)與正常對(duì)照組相比無明顯差異。
　　 在本研究的第三部分中，我們觀察了阻斷Ang/Tie2通路對(duì)HUVECs血管新生能力的影響。研究結(jié)果顯示，sTi

9、e2-Fc能明顯抑制1.5％葡萄糖和1.5％甘露醇誘導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞遷移數(shù)目（1.5％葡萄糖+ sTie2-Fc vs 1.5％葡萄糖,191.8±8.93vs 236±15.30,p<0.05；1.5％甘露醇+sTie2-Fc vs 1.5％甘露醇,205.8±16.63vs 238.6±13.85，p<0.05；），但仍多于正常對(duì)照組（1.5％葡萄糖+sTie2-Fc vs對(duì)照組, 191.8±8.93 vs 169.2±6.88, p

10、<0.05；1.5％甘露醇+ sTie2-Fcvs對(duì)照組, 205.8±16.63 vs 169.2±6.88, p<0.05）。阻斷Ang/Tie2能顯著減少1.5％葡萄糖和1.5％甘露醇誘導(dǎo)的HUVECs管狀結(jié)構(gòu)形成（1.5％葡萄糖+sTie2-Fc vs對(duì)照組, 6.4±1.14vs9.8±1.30 ,p<0.05；1.5％甘露醇+ sTie2-Fc vs對(duì)照組, 6.2±1.10vs9.8±1.30 ,p<0.05；）。

11、　　 綜上，高濃度葡萄糖可能通過促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞增殖、遷移和血管形成能力在長期腹透中起促血管新生作用，而這一作用主要與其本身產(chǎn)生的高滲透壓有關(guān)，并且高濃度葡萄糖還可能具有獨(dú)立于其高滲透壓之外的促血管新生作用。高濃度葡萄糖能夠影響內(nèi)皮細(xì)胞Ang2 的表達(dá)并且葡萄糖本身具有獨(dú)立于高滲透壓的上調(diào)Ang2的作用。Ang2/Tie2通路可能參與了高濃度葡萄糖誘導(dǎo)的腹膜血管新生過程。阻斷Ang2/Tie2可明顯抑制高濃度葡萄糖誘導(dǎo)的血管新生過程，提示