藍(lán)刺頭水提物對(duì)實(shí)驗(yàn)性Ⅰ型糖尿病小鼠降血糖作用及其機(jī)理研究.pdf

1、糖尿病是繼腫瘤和心血管疾病之后第三大影響人類健康的疾病，其發(fā)病人數(shù)呈逐年上升的趨勢(shì)。因此，尋找使用方便、療效確切的血糖控制藥物，對(duì)糖尿病及其并發(fā)癥的治療顯得十分重要。藍(lán)刺頭具有多種藥理活性，民間有利用藍(lán)刺頭進(jìn)行糖尿病輔助治療的傳統(tǒng)，但國(guó)內(nèi)外均未見相關(guān)研究報(bào)道，本文以Ⅰ型糖尿病小鼠模型為研究對(duì)象對(duì)藍(lán)刺頭水提物(WET)的降血糖作用進(jìn)行觀察，進(jìn)而確定了藍(lán)刺頭水提物中降血糖的有效成分，并對(duì)其降血糖的分子機(jī)理進(jìn)行了相關(guān)研究，以便為新型降血糖藥物

2、的開發(fā)提供參考依據(jù)。
　　1.在按照85mg/kg體重劑量尾靜脈注射1％的四氧嘧啶溶液成功構(gòu)建Ⅰ型糖尿病小鼠模型的基礎(chǔ)上，對(duì)WET的降血糖作用進(jìn)行了觀察。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，WET能夠顯著地降低糖尿病小鼠的空腹血糖，改善口服糖耐量，升高肝糖原和血清胰島素含量，對(duì)糖尿病小鼠的體重和胰高血糖素影響不顯著;而對(duì)健康小鼠的空腹血糖、口服糖耐量、肝糖原、血清胰島素、體重和胰高血糖素含量均不產(chǎn)生影響。確定WET對(duì)Ⅰ型糖尿病小鼠具有降血糖作用，對(duì)健康小鼠

3、血糖不產(chǎn)生影響。
　　2.為確定WET中降血糖的有效成分，首先對(duì)WET中可能含有的降血糖物質(zhì)進(jìn)行了鑒定，結(jié)果顯示W(wǎng)ET中確定含有多糖類成分，并采用水提醇沉法獲得藍(lán)刺頭粗多糖(ETCP)。對(duì)比ETCP及其剩余成分(ETX)的降血糖效果后發(fā)現(xiàn)ETCP能夠顯著降低糖尿病小鼠的空腹血糖。采用木瓜蛋白酶法去除ETCP中的蛋白質(zhì)，并對(duì)其工藝參數(shù)進(jìn)行優(yōu)化，在反應(yīng)時(shí)間為2.6h，體系pH為6.0，反應(yīng)溫度為64℃的條件下多糖保留率為98.12％，

4、蛋白清除率為56.57％。將脫蛋白后的藍(lán)刺頭多糖(ETP)使用DEAE-52柱層析進(jìn)行分離純化，采用不同濃度NaCl溶液進(jìn)行洗脫分級(jí)得到一種中性多糖ETPA和兩種酸性多糖ETPB、ETPC。將三種多糖分別經(jīng)Sephadex G200柱層析，采用蒸餾水進(jìn)行洗脫分級(jí)，確定ETPA含有兩種不同分子量的多糖ETPA1、ETPA2，ETPB和ETPC各為分子量均一的多糖。對(duì)ETPA、ETPB、ETPC的降血糖效果進(jìn)行比較后發(fā)現(xiàn)ETPB能夠顯著的降

5、低Ⅰ型糖尿病小鼠的空腹血糖，確定WET中降血糖的主要成分為ETPB。
　　3.對(duì)灌胃ETPB后Ⅰ型糖尿病小鼠的空腹血糖、體重、口服糖耐量、肝糖原、血清胰島素和胰高血糖素含量進(jìn)行了測(cè)定，并利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR的方法對(duì)小鼠胰腺中PDX-1、IRS-2、Fas、caspase-3、GK、GLUT2及肝臟中GK、G-6-P基因的相對(duì)表達(dá)量進(jìn)行了研究，分析ETPB對(duì)Ⅰ型糖尿病小鼠降血糖作用的分子機(jī)制。結(jié)果發(fā)現(xiàn)ETPB能夠降低糖尿病小鼠的空

6、腹血糖，增加體重，改善口服糖耐量，增加肝糖原和血清胰島素含量，對(duì)胰高血糖素?zé)o影響。實(shí)時(shí)熒光定量PCR對(duì)各基因的測(cè)定結(jié)果顯示，ETPB能夠上調(diào)胰腺中PDX-1、IRS-2、Fas、 caspase-3、GK、GLUT2基因及肝臟中GK基因的表達(dá)，對(duì)肝臟中G-6-P基因表達(dá)無(wú)影響。綜合分析ETPB降血糖的分子機(jī)理為ETPB通過(guò)上調(diào)胰腺PDX-1和IRS-2基因的表達(dá)，增加胰島β細(xì)胞的再生，下調(diào)胰腺中凋亡相關(guān)因子Fas，caspase-3基因

7、的表達(dá)抑制胰島β細(xì)胞的凋亡，促進(jìn)胰島β細(xì)胞中GK、GLUT2基因的表達(dá)增加血清胰島素的含量，同時(shí)促進(jìn)肝臟中GK基因的表達(dá)提高肝臟糖代謝能力，相關(guān)實(shí)驗(yàn)研究也證明了這一結(jié)論。
　　全文研究表明，WET具有較好的降血糖作用，其中ETPB為其降血糖作用的主要成分，其可能機(jī)制包括促進(jìn)胰島β細(xì)胞的再生、抑制胰島β細(xì)胞的凋亡、促進(jìn)胰島素的分泌、提高肝臟糖代謝能力。但ETPB的結(jié)構(gòu)有待進(jìn)一步的明確，同時(shí)其降血糖作用機(jī)理需進(jìn)行更深入的研究，為藍(lán)刺頭