膜表面活性劑泊洛沙姆188抗腦外傷后神經(jīng)細(xì)胞死亡作用及機(jī)制研究.pdf

1、目的：細(xì)胞質(zhì)膜完整性的破壞是導(dǎo)致腦外傷后繼發(fā)性損傷的主要原因之一，我們的前期研究證實(shí)腦外傷可引起神經(jīng)細(xì)胞凋亡及自噬激活等一些繼發(fā)性事件。本研究主要以質(zhì)膜完整性作為切入點(diǎn)，探索質(zhì)膜修復(fù)劑泊洛沙姆188(P188)能否對(duì)腦外傷引起的細(xì)胞凋亡及自噬等產(chǎn)生影響，進(jìn)而起到神經(jīng)保護(hù)作用，并對(duì)其保護(hù)機(jī)制進(jìn)行探討。
　　 方法：利用改良的自由落體裝置建立小鼠定量腦外傷(traumatic brain iniury，TBI)模型。腦外傷后P188

2、通過(guò)鼠尾靜脈立即給藥，并按傷后時(shí)間不同分別于處死前1h用腹腔注射法將碘化丙啶(propidium iodide，PI)注入各組小鼠腹腔內(nèi)，采用體視學(xué)顯微鏡觀察損傷細(xì)胞并計(jì)數(shù)各組損傷中心區(qū)及周邊區(qū)陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)，研究P188對(duì)TBI引起的神經(jīng)細(xì)胞質(zhì)膜完整性破壞的影響；為了探討PI陽(yáng)性細(xì)胞能否代表腦外傷引起的細(xì)胞丟失，用組織缺損體積(1esion volume，LV)評(píng)估TBI后腦組織缺損情況；應(yīng)用行為學(xué)試驗(yàn)(Motor Test和Morris

3、水迷宮試驗(yàn))方法評(píng)估TBI后各組動(dòng)物的運(yùn)動(dòng)和學(xué)習(xí)記憶功能，以探討腦外傷引起的細(xì)胞丟失能否導(dǎo)致功能性損害。同時(shí)還檢測(cè)了激活型的Caspase-3及凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)水平，并對(duì)凋亡機(jī)制進(jìn)行了深入的探討；并檢測(cè)了P188對(duì)腦外傷后細(xì)胞自噬信號(hào)途徑的影響，并對(duì)其作用機(jī)制進(jìn)行了探討。
　　 結(jié)果：(1)腦外傷后傷側(cè)腦組織中均發(fā)現(xiàn)PI陽(yáng)性細(xì)胞，其數(shù)量在24小時(shí)至48小時(shí)時(shí)間點(diǎn)達(dá)到高峰；與生理鹽水組比較，P188組PI陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量均在腦外傷后2

4、4小時(shí)和48小時(shí)時(shí)間點(diǎn)顯著降低(P<0.05)。(2)與生理鹽水組比較，P188能明顯減少腦的缺損體積；與假手術(shù)組比較，小鼠腦外傷后尋找水迷宮平臺(tái)有更長(zhǎng)的潛伏期，提示腦外傷能引起學(xué)習(xí)和記憶功能障礙；與生理鹽水組比較，P188處理后能明顯加快其運(yùn)動(dòng)功能的恢復(fù)；P188處理組在腦外傷后表現(xiàn)出更短的潛伏期(P<0.05)。(3)腦外傷引起的caspase-3的激活、細(xì)胞色素c釋放、Bcl-2蛋白表達(dá)水平下調(diào)以及Bax、P53蛋白表達(dá)水平表達(dá)上

5、調(diào)，P188處理后能逆轉(zhuǎn)這種改變；與鹽水組比較，P188處理后使caspase-8和caspase-9的蛋白水平下調(diào)。(4)與鹽水組比較，P188組腦外傷引起的的LC-3Ⅱ蛋白表達(dá)水平明顯增高，P62明顯降低，hVps34與Beclin-1蛋白水平大量增加。
　　 結(jié)論：(1)P188處理后能減少腦外傷引起的細(xì)胞死亡和腦組織缺損，減輕運(yùn)動(dòng)及學(xué)習(xí)記憶功能障礙。(2)腦外傷后可引起神經(jīng)細(xì)胞凋亡，P188通過(guò)抑制caspase-8和c