不同灸法對(duì)實(shí)驗(yàn)性RA的抗炎效應(yīng)及其HSP70調(diào)控機(jī)制研究.pdf

1、目的:
　　本研究在把握艾灸溫?zé)岽碳ぬ匦?、HSP70與熱刺激和抗炎密切相關(guān)的基礎(chǔ)上，以針灸理論為指導(dǎo)，直接灸、隔姜灸、溫和灸日本大耳白兔“腎俞”、“足三里”治療實(shí)驗(yàn)性RA，圍繞滑膜炎癥關(guān)鍵病理環(huán)節(jié)，選擇HSP70作為研究切入點(diǎn)，以“艾灸溫?zé)岽碳ぁ狧SP70表達(dá)與調(diào)控—抗炎效應(yīng)”為研究主線，運(yùn)用免疫組化、Western-blot等方法技術(shù)，探索不同灸法治療RA的抗炎作用及其HSP70分子調(diào)控機(jī)制，進(jìn)一步深化艾灸治療RA的原理研究，為

2、臨床運(yùn)用灸法治療RA提供更豐富的科學(xué)依據(jù)。
　　方法:
　　日本大耳白兔64只，體重2.5±0.25kg，雌雄各半，隨機(jī)分為空白對(duì)照組(簡(jiǎn)稱空白組)、RA模型組(簡(jiǎn)稱模型組)、直接灸治療組(簡(jiǎn)稱直接灸組)、隔姜灸治療組(簡(jiǎn)稱隔姜灸組)、溫和灸治療組(簡(jiǎn)稱溫和灸組)、直接灸＋槲皮素阻斷組（簡(jiǎn)稱直+槲組）、隔姜灸＋槲皮素阻斷組（簡(jiǎn)稱隔+槲組）、溫和灸＋槲皮素阻斷組（簡(jiǎn)溫+槲組），每組8只日本大耳白兔。采用福氏完全佐劑塑造實(shí)驗(yàn)性R

3、A模型，并于造模后第7天開(kāi)始分別用直接灸、隔姜灸、溫和灸三種不同方法施灸日本大耳白兔“腎俞”、“足三里”穴各五壯，兩側(cè)交替進(jìn)行，每日一次；6天為一個(gè)療程，共3個(gè)療程。在每個(gè)治療日早晨對(duì)各艾灸阻斷組日本大耳白兔以槲皮素灌胃200mg/kg，在體阻斷HSP70功能。于造模前、造模后第7天、治療后第7天、第14天、第21天分別用軟皮尺測(cè)量各組日本大耳白兔左右后肢膝關(guān)節(jié)周長(zhǎng)。于治療后第21天靜脈注射空氣處死各組日本大耳白兔，取關(guān)節(jié)滑膜液、滑膜組

4、織和下丘腦，運(yùn)用Elisa法檢測(cè)滑膜液中細(xì)胞因子IL-1、TNF-α、IL-6、IL-8及HSP70含量，用免疫組化法檢測(cè)滑膜組織NF-κB相關(guān)分子表達(dá)及HSP70含量，用Western-blot法檢測(cè)下丘腦HSP70含量。
　　結(jié)果:
　　1．造模前,各組間日本大耳白兔左、右膝關(guān)節(jié)周長(zhǎng)無(wú)顯著性差異(P>0.05)，具有可比性。造模后第7天，模型組及各艾灸治療組日本大耳白兔左右膝關(guān)節(jié)周長(zhǎng)均較空白組明顯升高(P<0.01)，各

5、檢測(cè)時(shí)間點(diǎn)模型組日本大耳白兔左右膝關(guān)節(jié)周長(zhǎng)均明顯高于空白組(P<0.01)，說(shuō)明造模成功且炎癥持續(xù)存在；治療后第7天、14天、21天，各艾灸治療組日本大耳白兔左右膝關(guān)節(jié)周長(zhǎng)明顯低于模型組(P<0.01)，說(shuō)明三種灸法均有明顯抗炎效應(yīng)；治療后第21天，各個(gè)艾灸組中，隔姜灸組日本大耳白兔左右膝關(guān)節(jié)周長(zhǎng)明顯低于溫和灸組、直接灸組(P<0.05），抗炎效應(yīng)更為突出。槲皮素阻斷各艾灸組之間無(wú)顯著性差異。
　　2．模型組 IL-1、TNF-α

6、、IL-6、IL-8值明顯高于空白組(P<0.01)；與模型組相比，各艾灸治療組IL-1、TNF-α、IL-6、IL-8值明顯降低有顯著性差異(P<0.05，P<0.01)；各艾灸組中，與溫和灸組、直接灸組比較，隔姜灸組 IL-1、TNF-α、IL-6、IL-8值降低明顯，有顯著性差異（P<0.05，P<0.01）。槲皮素阻斷各艾灸組之間IL-1、TNF-α、IL-6、IL-8值無(wú)顯著性變化。與隔姜灸組比，槲皮素阻斷組隔姜灸組IL-1、

7、IL-6、IL-8值明顯升高，(P<0.01)有顯著性差異。
　　3．模型組NF-κBp65、NF-κBp50、IKK值明顯高于空白組(P<0.01)；與模型組相比，各艾灸治療組NF-κBp65、NF-κBp50、IKK值明顯降低有顯著性差異(P<0.05， P<0.01)；各艾灸組中，與溫和灸組、直接灸組比較，隔姜灸組NF-κBp65、NF-κBp50、IKK值降低明顯，有顯著性差異（P<0.05，P<0.01）。槲皮素阻斷各艾

8、灸組之間NF-κBp65、NF-κBp50、IKK值無(wú)顯著性差異。與隔姜灸組比，槲皮素阻斷隔姜灸組NF-κBp65、NF-κBp50、IKK值明顯升高（P<0.05，P<0.01）。
　　4．模型組滑膜液HSP70值高于空白組(P<0.01)；與模型組相比，各艾灸治療組滑膜液HSP70值明顯增高(P<0.01，P<0.05)；與相對(duì)應(yīng)的艾灸組比較，槲皮素阻斷各艾灸組滑膜液HSP70值明顯降低，有顯著性差異（P<0.01）。

9、　　5．模型組滑膜組織HSP70值高于空白組(P<0.05)；與模型組相比，各艾灸治療組滑膜組織HSP70值明顯增高(P<0.01，P<0.05)；與相對(duì)應(yīng)的艾灸組比較，槲皮素阻斷各艾灸組滑膜組織HSP70值明顯降低，有顯著性差異（P<0.01，P<0.05）。
　　6.模型組下丘腦HSP70值與空白組比較明顯升高(P<0.05)；與模型組相比，各艾灸治療組下丘腦HSP70值明顯升高(P<0.01，P<0.05)；與相對(duì)應(yīng)的艾灸組

10、比較，各艾灸組下丘腦HSP70無(wú)明顯差異。
　　結(jié)論:
　　1.不同灸法均具有明確的抗炎效應(yīng)，但以隔姜灸作用最為明顯，而運(yùn)用工具藥槲皮素可以取消不同灸法之間的抗炎效應(yīng)差異。
　　2.不同灸法均可誘導(dǎo)滑膜組織和滑膜液RA模型動(dòng)物HSP70大量表達(dá)，運(yùn)用槲皮素可在一定程度上抑制HSP70表達(dá)，提示HSP70可能在不同灸法的抗炎效應(yīng)中發(fā)揮重要作用。
　　3.雖然槲皮素可以取消隔姜灸與溫和灸、直接灸的抗炎效應(yīng)差異，但并不