雛鴨原代肝細(xì)胞培養(yǎng)及DHAV-1致肝細(xì)胞損傷的研究.pdf

1、肝臟參與多種代謝過(guò)程，是人和動(dòng)物的重要的器官。各種致病因子可直接或間接作用于肝臟，導(dǎo)致其結(jié)構(gòu)和或功能異常。這些致病因子主要包括病原微生物、毒素、藥物等。鴨甲型肝炎病毒1型（Duck hepatitisAvirus-1，DHAV-1）感染4周齡內(nèi)雛鴨后，造成雛鴨的急性死亡，病變表現(xiàn)為肝臟的出血、壞死、膽管增生、脂肪變性;并可以在雞胚尿囊膜、雞胚成纖維細(xì)胞、鴨胚腎細(xì)胞和肝細(xì)胞等細(xì)胞中增殖，造成細(xì)胞病變。致病因子的性質(zhì)不同，肝損傷的機(jī)制不同。

2、在研究肝損傷相關(guān)機(jī)制時(shí)發(fā)現(xiàn)DHAV-1感染雛鴨后表現(xiàn)為高血脂和低血糖，肝內(nèi)脂代謝異常，脂肪含量增多。基質(zhì)金屬蛋白酶(Matrix metalloproteinase，MMP)9、Notch1基因會(huì)引起病理?xiàng)l件下的肝臟出血、壞死及膽管增生，因此本試驗(yàn)在建立雛鴨DHAV-1感染模型的基礎(chǔ)上，試圖研究DHAV-1對(duì)雛鴨肝臟的損傷過(guò)程中肝臟中脂肪代謝相關(guān)基因、MMP-9、Notch1發(fā)揮的作用。
　　第一部分:試驗(yàn)成功的培養(yǎng)了雛鴨原代肝細(xì)

3、胞，并建立DHAV-1感染雛鴨原代肝細(xì)胞模型。運(yùn)用QPCR研究雛鴨原代肝細(xì)胞和雛鴨肝臟內(nèi)的甘油二酯酰基轉(zhuǎn)移酶2（Diacylglycerol acyltransferase2，DGAT2）、甘油三酯脂肪酶(Adipose triglyceridelipase，ATGL)、微粒體甘油三酯轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(Microsomal triglyceride transfer protein，MTP)基因表達(dá)水平。結(jié)果顯示:雛鴨原代肝細(xì)胞感染DHAV-1

4、后DGAT2和ATGL呈升高的趨勢(shì)，MTP表達(dá)是下降的，感染組細(xì)胞培養(yǎng)上清中的游離脂肪酸(Free fattyacid，F(xiàn)FA)含量8h最低，然后24h后上升。雛鴨感染組中肝臟DGAT2和ATGL基因轉(zhuǎn)錄水平上均呈升高的趨勢(shì)，MTP在12h降低，24h表達(dá)升高，隨后呈降低趨勢(shì)。說(shuō)明雛鴨原代肝細(xì)胞和雛鴨肝臟中的蓄積的脂肪為甘油三酯(Triglyceride，TG)，且MTP在TG的蓄積中發(fā)揮重要作用。
　　第二部分:運(yùn)用QPCR研究

5、病毒感染后雛鴨肝臟中核調(diào)節(jié)因子-κB(Nucleusfactor-κB，NF-κB)、MMP-9、血小板內(nèi)皮細(xì)胞粘附因子(Platelet endothelial celladhesion molecule，PECAM)1、Jagged1、Notch1及Notch2的表達(dá)，運(yùn)用Western Blot檢測(cè)MMP-9蛋白表達(dá)。結(jié)果表明:NF-κB基因轉(zhuǎn)錄水平24h顯著升高，之后呈升高趨勢(shì)。MMP-9基因轉(zhuǎn)錄水平在24h開(kāi)始均呈升高趨勢(shì)，其