異甘草素對自發(fā)性高血壓大鼠腦基底動脈平滑肌細胞大電導(dǎo)鈣激活鉀通道的作用.pdf

1、目的:研究異甘草素(Isoliquiritigenin，ISL)對自發(fā)性高血壓大鼠(Spontaneously hypertension rats，SHR)腦基底動脈血管平滑肌細胞(Vascular smooth muscle cell，VSMC)大電導(dǎo)鈣激活鉀通道(Large conductance Ca2+-activated K+channel，BKCa)的調(diào)節(jié)作用。
　　方法:在使用異甘草素干預(yù)處理前后，用尾動脈測壓儀觀察

2、SHR血壓變化；依次用10-5 mol/L苯腎上腺素(phenylephrine，PE)、10-5mol/L苯腎上腺素和10-4mol/L異甘草素、10-5 mol/L苯腎上腺素分別對SHR腦基底動脈灌流后，腦基底動脈的直徑應(yīng)用壓力型小動脈儀進行測量；用全細胞膜片鉗技術(shù)研究SHR腦基底動脈平滑肌細胞（VSMC）BKCa通道電流的變化；用ELISA技術(shù)觀察SHR腦基底動脈內(nèi)cGMP水平變化。
　　結(jié)果：(1) ISL干預(yù)前SHR血壓

3、是(218.3±1.6) mmHg，與WKY血壓(119±2.1) mmHg相比，兩者具有顯著統(tǒng)計學(xué)差異(p<0.01,n=6)。與ISL干預(yù)前相比，ISL灌胃(12mg/kg.d)14天后SHR血壓降至(119.2±1.9) mmHg(p<0.01,n=6)，但與WKY血壓沒有明顯差異；
　　(2)含有PE(10-5mol/L)的PSS液體在壓力型小動脈測量儀水浴槽內(nèi)持續(xù)對血管段進行灌流，待血管段收縮狀態(tài)穩(wěn)定后，再用含有ISL(

4、10-4mol/L)和PE(10-5mol/L)的PSS液體持續(xù)灌流沖洗，血管舒張達到穩(wěn)定狀態(tài)后，給予含PE(10-5mol/L)的PSS液體再次持續(xù)灌流沖洗，記錄血管直徑分別為:(235.6±26)μm、(309.2±25)μm和(241.1±27)μm，提示ISL舒張SHR腦基底動脈(n=6，p<0.01)；
　　(3)單個腦基底動脈平滑肌細胞鉗制電壓在-40 mV，外向電流在刺激電壓-40~-20 mV區(qū)間內(nèi)無顯著變化，10

5、-4mol/L ISL在0-60 mV區(qū)間內(nèi)可以呈電壓依賴性增強腦基底動脈平滑肌細胞外向電流(n=6,p<0.05)；
　　(4)在0、10-7、10-6、10-5、10-4和3×10-4 mol/L異甘草素作用下，平滑肌細胞+60mV時的外向電流分別是（144±25）pA、（156±24）pA、（173±24）pA、（211±21）pA、（252±21） pA和（262±20）pA。除10-7 mol/L異甘草素組和對照組沒有明

6、顯差異外，其余各組均呈濃度依賴性增強外向電流，提示ISL呈濃度依賴性增強腦基底動脈平滑肌細胞外向電流(n=6，p<0.05)，且增強平滑肌細胞外向電流的EC50為9.5μmol/L；
　　(5)異甘草素干預(yù)后的SHR平滑肌細胞外向電流（+60mV）從(212.1±32) pA增加到(283.2±28) pA(p<0.01，n=6)，用10-3mol/L四乙胺( TEA，BKCa通道阻斷劑）灌流3min后，SHR平滑肌細胞在+60m

7、V時的外向電流減小到(143.4±21) pA(p<0.05，n=6)。該結(jié)果提示異甘草素增強的平滑肌細胞外向電流由BKCa通道介導(dǎo)；
　　(6)預(yù)灌流10-5mol/L亞甲藍(MB,可溶性鳥苷酸環(huán)化酶阻斷劑)3min后，異甘草素增強的平滑肌細胞外向電流（+60mV）從（324.3±74）pA減小到（171.9±42）pA( p<0.05，n=6)，與對照組（163.9±43）pA相比沒有統(tǒng)計學(xué)差異。該結(jié)果提示異甘草素增強的外向電

8、流主要由可溶性鳥苷酸環(huán)化酶(Soluble Guanylyl Cyclase，sGC)介導(dǎo)；
　　(7)在正常電極內(nèi)液下，給予10-4mol/L ISL預(yù)灌流3 min后，腦基底動脈VSMC的外向電流(+60mV)由(191.1±31) pA增加至(381±35) pA(n=6，p<0.01)。在電極內(nèi)液中加入20μmol/L BAPTA-AM(選擇性鈣離子螯合劑)，再給予10-4mol/L ISL預(yù)灌流3 min后，腦基底動脈V

9、SMC的外向電流(+60mV)由(76.7±18) pA增加至(151.4±19) pA(n=6，p<0.01)。該結(jié)果提示BAPTA-AM可以明顯抑制各組平滑肌細胞的生理外向電流，但對異甘草素增強腦基底動脈VSMC外向電流的比率無顯著影響；
　　(8)異甘草素干預(yù)14d后，SHR腦基底動脈內(nèi)cGMP水平由(31.4±3.8) pmol/mg protein增加至(78.7±12.7) pmol/mg protein(p<0.05