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1、目的:人乳頭瘤病毒為廣泛感染人類皮膚、生殖道、呼吸道等上皮組織的無囊膜小DNA病毒,至今已發(fā)現(xiàn)有100多個型別,而HPV16型是中國婦女宮頸癌感染的主要型別.表達人乳頭瘤病毒16(HPV16)晚期基因L1,為HPV感染的檢測、診斷和治療奠定基礎(chǔ).方法:收集宮頸癌組織標本,設(shè)計一對L1基因特異引物,用PCR方法從宮頸癌組織中獲得L1基因部分片段,構(gòu)建入克隆載體pGEM-T,雙向測定插入片段序列并進行序列分析;亞克隆入pBV220載體,經(jīng)酶
2、切鑒定后進行溫度誘導(dǎo)表達,所得蛋白再行Western-Blot和ELISA鑒定.結(jié)論:實驗中發(fā)現(xiàn)所得到的HPV16 L1 DNA序列與國內(nèi)報道4處堿基變化又有所不同.即原始序列5892處的C變?yōu)門;6337處的核苷酸C變?yōu)門;6423處的核苷酸A變?yōu)镚;6799處的核苷酸T變?yōu)镃.說明各地區(qū)的宮頸癌組織中所獲HPV16L1基因有所差異,在針對各地區(qū)的HPV感染檢測時,應(yīng)考慮地區(qū)因素.重組表達蛋白進行Western-blot分析和ELIS
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