煙草抗生物和非生物脅迫相關(guān)基因的克隆、表達(dá)與功能分析.pdf

1、植物常常受到生物或/和非生物脅迫，嚴(yán)重影響了植物的生長(zhǎng)與發(fā)育，甚至導(dǎo)致植物無(wú)法完成它們的生命周期。煙草是一種經(jīng)濟(jì)作物，也是一種重要的模式植物。煙草花葉病毒(TMV)是煙草的主要病害之一。煙草與TMV的相互作用是研究植物抗病機(jī)理的重要模式之一。對(duì)煙草受TMV和其它脅迫誘導(dǎo)的相關(guān)基因的表達(dá)和功能進(jìn)行研究，為理解植物抗生物和非生物脅迫機(jī)理有重要意義。 本論文主要從兩方面進(jìn)行煙草抗脅迫相關(guān)基因的研究。其一，我們用RNA沉默技術(shù)研究了一個(gè)

2、抗病基因的功能。其二，結(jié)合生物信息學(xué)和分子生物學(xué)技術(shù)克隆脅迫相關(guān)基因，并且，對(duì)它們的表達(dá)特性做出進(jìn)一步分析。具體內(nèi)容如下： 1、利用PCR的方法擴(kuò)增出CN基因片段和GUS基因，通過(guò)不同的酶雙酶切后連接成中間含GUS基因的CN基因片段反向重復(fù)的序列，并插入到植物表達(dá)載體。通過(guò)農(nóng)桿菌介導(dǎo)的葉盤法轉(zhuǎn)化煙草Xanthi-nc和HZNH，獲得了32株轉(zhuǎn)基因Xanthi-nc和25株轉(zhuǎn)基因HZNH。轉(zhuǎn)基因Xanthi-nc沒(méi)有喪失對(duì)TMV的

3、抗性，說(shuō)明CN基因的沉默載體不能沉默N基因的表達(dá)。推測(cè)CN基因可能是HZNH中特有的抗性基因。 2、通過(guò)對(duì)EST數(shù)據(jù)庫(kù)中進(jìn)行搜索和拼接，得到了兩條可能與抗病基因相關(guān)的基因片段。根據(jù)這兩個(gè)片段設(shè)計(jì)引物，克隆出包含完整開(kāi)放閱讀框的兩個(gè)基因NLRR1和NLRR2。兩個(gè)新基因都不同程度地受到TMV、野火病和高鹽的誘導(dǎo)表達(dá)。推測(cè)這兩個(gè)新基因參與了煙草對(duì)生物和非生物脅迫的應(yīng)答調(diào)控。 3、通過(guò)已知序列在EST數(shù)據(jù)庫(kù)中進(jìn)行比對(duì)和拼接，得