稻瘟菌FJ95054B菌株無毒基因的遺傳分析及其BAC文庫(kù)的構(gòu)建.pdf

1、子囊菌稻瘟病菌Magnaporthegrisea(無性Pyriculariagrisea)引起的稻瘟病是世界上最重要的水稻病害之一。目前，利用抗病品種是控制該病最經(jīng)濟(jì)、最有效的措施，但是，由于其遺傳上的多樣性與復(fù)雜性，稻瘟病菌很快地便會(huì)克服寄主的抗性。而稻瘟病菌有性世代的發(fā)現(xiàn)及利用，為從分子水平研究該病菌的致病相關(guān)因子的遺傳、變異及致病相關(guān)基因的克隆、功能研究提供了良好的試驗(yàn)材料。本研究利用FJ95054B與GUY11交配，建立一個(gè)隨機(jī)

2、后代群體，并進(jìn)行有性后代的遺傳分析，同時(shí)利用FJ95054B構(gòu)建了一個(gè)稻瘟病菌的BAC文庫(kù)。 本研究首先對(duì)FJ95054B與GUY11這兩個(gè)親本菌株進(jìn)行毒性分析。將FJ95054B與GUY11接種在已知抗性基因的24個(gè)IRBL系列與9個(gè)日本的水稻品種上，結(jié)果表明，F(xiàn)J95054B只對(duì)這33個(gè)品種中的3個(gè)有毒，而GUY11對(duì)26個(gè)品種有毒。而且FJ95054B與GUY11只在6個(gè)品種上的致病類型一致?？梢?，這兩個(gè)菌株之間的毒性存在

3、著較大的差異。利用已知含單一抗性基因的C101LACPi-1(t)，C101A51Pi-2(t)，C104PKTPi-3(t)，C101PKTPi-4a，C105PPT-4L-23Pi-4b和CO39近等基因系品種對(duì)這兩個(gè)菌株進(jìn)行毒性分析的結(jié)果表明，F(xiàn)J95054B含Avr-Pil，Avr-Pi2和Avr-Pi4a等無毒基因，而GUY11只含Avr-Pi4b無毒基因。 對(duì)FJ95054B與GUY11交配產(chǎn)生的79個(gè)有性后代進(jìn)行毒

4、性分析的結(jié)果表明，后代在C101LACPi-1(t)，C101A51Pi-2(t)和C101PKTPi-4a上的無毒、有毒分離比例符合1∶1，有6個(gè)后代個(gè)體發(fā)生了這三個(gè)無毒位點(diǎn)的重組。因此，推斷FJ95054B對(duì)這三個(gè)品種的無毒性由三個(gè)不同的單一位點(diǎn)控制，且三個(gè)位點(diǎn)緊密連鎖。而有性后代在C105PPT-4L-23Pi-4b的無毒性、毒性后代分離比例符合3∶1的期望值。 圖位克隆是克隆無毒基因的一種主要方法，而基因組文庫(kù)——尤其是

5、BAC文庫(kù)又是圖位基因克隆的一個(gè)關(guān)鍵性技術(shù)平臺(tái)。在本研究中，稻瘟菌菌株FJ95054B經(jīng)提取純化得到其基因組DNA，用限制性內(nèi)切酶HindⅢ部分酶切后，采用兩種方法(B-瓊脂糖酶消化及利用電洗脫儀洗脫)回收大片段DNA，與載體CopyControlpCC1BAC按10∶1比例相互連接，轉(zhuǎn)化TransforMaxEPI300E.coli感受態(tài)細(xì)胞，通過藍(lán)白斑篩選挑取白色克隆從而構(gòu)建了FJ95054B菌株的稻瘟病菌細(xì)菌人工染色體(BAC)基