大豆異黃酮對體外培養(yǎng)成骨細胞代謝作用的研究.pdf

1、目的:該研究以SI作用于新生SD大鼠顱骨OB,采用多次酶消化法分離培養(yǎng)原代OB,E<,2>作為實驗對照組,通過測定生化指標及對細胞形態(tài)的觀察,研究SI對OB增殖及分化等各方面的影響,并與E<,2>比較,探討其機制,為SI預(yù)防治療POP提供科學(xué)依據(jù).方法:1.體外大鼠OB的分離及原代培養(yǎng):取新生SD大鼠顱骨,采用多次酶消化法分離OB,進行原代體外培養(yǎng),實驗持續(xù)24天.Gomori鈣鈷法進行ALP染色鑒定OB.MTT法測定細胞增殖,繪制生長

2、曲線.茜素紅法進行礦化結(jié)節(jié)染色.2.SI對大鼠OB代謝作用的研究:采用第二繼代OB進行實驗.(1)劑量分組:實驗分為正常對照組(Normal Control組),SI各濃度組(10<'-8>,10<'-7>,10<'-6>,10<'-5>M),實驗對照組(E<,2>組,采用10<'-10>M的E<,2>).(2)SI對OB增殖、分化的影響:待細胞貼壁后,換加藥培養(yǎng)基,作用48h及72h后,測定細胞MTT(OD).培養(yǎng)72h后,測定胞漿內(nèi)

3、蛋白含量、ALP及BGP含量.(3)SI對OB成骨能力的影響:待細胞貼壁后,換加藥培養(yǎng)基,培養(yǎng)72h,測定細胞內(nèi)Ⅰ型膠原合成情況.加藥連續(xù)培養(yǎng)18天,茜素紅染色,鏡下計數(shù)各組礦化結(jié)節(jié).(4)SI對OB合成TGF-β<,1>的影響:加藥培養(yǎng)72h,測定細胞內(nèi)TGF-β<,1>的含量.(5)SI對OB內(nèi)游離Ca<'2+>的影響:待細胞貼壁后,換三組培養(yǎng)基(Normal Control組、E<,2>組、10<'-5>M SI組),培養(yǎng)72小時

4、,測定細胞內(nèi)游離Ca<'2+>水平.(6)SI對OB超微結(jié)構(gòu)的影響:加藥培養(yǎng)72小時(Normal Control組、E<,2>組、10<'-5>M SI組),透射電鏡觀察細胞超微結(jié)構(gòu).結(jié)論:1.以新生SD大鼠顱骨為原料,通過多次酶消化法分離得到較高純度的原代OB,特征典型,數(shù)量較多,功能活躍,生長穩(wěn)定.2.SI可刺激OB增殖、分化.高劑量的SI功能更強.3.SI可促進OB成骨功能,高劑量組作用更明顯.4.SI可增加OB內(nèi)TGFβ-1的