異拔葜皂甙元對膽堿能神經(jīng)系統(tǒng)的保護作用及分子機制研究.pdf

1、老年性癡呆亦稱阿爾茲海默病(Alzheimer's Disease,AD),是一種以記憶減退、認知障礙為特征的中樞神經(jīng)退行性疾病.AD的主要病理特征為細胞外間隙一淀粉樣蛋白(AD)沉積所形成的老年斑(SP)、細胞內(nèi)異常磷酸化的Tau蛋白聚集所形成的神經(jīng)纖維纏結(jié)(NFT)以及皮層、海馬區(qū)神經(jīng)元丟失.在中樞膽堿能神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)則以基底前腦的MeyIlert基底核膽堿能系統(tǒng)變化最明顯.神經(jīng)生物化學研究顯示,AD患者乙酰膽堿(ACh)的合成減少,膽

2、堿乙酰轉(zhuǎn)移酶(ChAT)活性下降,與癡呆的嚴重程度密切相關(guān).腦源性營養(yǎng)因子(BDNF)及其受體的某種缺陷可引起的膽堿能神經(jīng)元形態(tài)、功能上的變化是造成學習記憶與認知功能衰退的主要原因之一.目前世界各國積極尋找有效藥物,但收效有限,但是中醫(yī)藥在防治神經(jīng)退行性疾病有其獨特之處. 已有的研究表明知母的活性成分ZMS能改善老年動物的學習記憶功能,但是其機制不明.本研究探討ZMS及其異構(gòu)體SMI對膽堿能神經(jīng)細胞退行性的影響和作用機制。

3、 一、整體動物實驗: 選用膽堿能損害擬AD大鼠模型和自然衰老模型,運用Y迷宮觀察行為學的變化；放射配基結(jié)合分析、放射化學、免疫組化和ELISA方法研究AD模型鼠腦M1受體和總M受體密度、腦ChAT活力和ChAT含量、腦BDNF含量的的變化,以及藥物SMI的作用.結(jié)果顯示:SMI能明顯改善模型大鼠學習指數(shù)和記憶指數(shù)；明顯上調(diào)模型大鼠M受體和/或M1受體密度；明顯提升增齡引起下降的大鼠腦ChAT功能；明顯上調(diào)增齡引起下降的BDNF

4、表達,但均未超過正常對照組. 二、離體細胞實驗觀察SMI對Aβ誘導的AD細胞模型生存率(MTT法)、M受體密度、ChAT陽性細胞、細胞上清中BDNF蛋白水平和細胞內(nèi)BDNFmRNA水平(RT-PCR法)的影響.加用BDNF功能性抗體和化學性阻斷劑K252a阻斷BDNF-trkB通路,了解BDNF-trkB通路是否直接參與了SMI保護作用.結(jié)果顯示:SMI上調(diào)AD模型細胞下降的MTT值；提升AD細胞模型下降的M受體密度；保護ChA

5、T陽性細胞(數(shù)目和軸突)；可提升AD細胞模型下降的BDNF蛋白水平和BDNFmRNA水平,且都高于正常對照組；加用BDNF功能性抗體和化學性阻斷劑K252a阻斷BDNF-trkB通路后,可以抵消SMI保護AD細胞模型的功能,包括對M受體密度和ChAT陽性細胞. 三、結(jié)論 1.SMI對Aβ毒性損傷所致的學習記憶功能減退具有保護作用,提升模型組下降的M 受體密度和M1受體密度；SMI對增齡引起的學習記憶功能減退具有保護作用,

6、提高下降的M受體密度,改善ChAT活力,升高增齡引起的BDNF水平.這都對AD的有效防治具有重要意義. 2.SMI能有效阻止Aβ毒性損傷所致的神經(jīng)細胞毒作用.SMI對Aβ毒性作用所引起的BDNF水平的下降,M受體密度的下降,ChAT陽性細胞數(shù)目減少和ChAT陽性細胞軸突斷裂縮短具有抑制作用.同時實驗表明了BDNF確實參與了SMI恢復Aβ毒性損傷所致的神經(jīng)細胞的膽堿能功能. 3.SMI具有與目前臨床使用的膽堿酯酶抑制劑不同