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文檔簡介
1、前列腺增生是中老年男性的一種常見病多發(fā)病,常用的化學(xué)藥物都有一些副作用,而中成藥前列康上市以來,療效明確,未見明顯的副作用,因此深入研究前列康的作用機(jī)理,分離分析其活性成份,對活性成份進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定,有可能從中發(fā)現(xiàn)新的先導(dǎo)化合物,從而未發(fā)現(xiàn)新的化學(xué)藥物打下基礎(chǔ)。 前列康的主要成分是油菜花粉。在前列康的說明書中所寫的作用機(jī)理為抑制5α—還原酶將睪酮轉(zhuǎn)化為二氫睪酮,但其中起作用的化學(xué)成分一直未能揭示。本文首先建立分析方法,在比較了液相
2、色譜法,紫外分光光度法測定等幾種酶活性方法之后,建立了一種基于氣相色譜法的酶活性分析方法,分別測定底物睪酮的消失與產(chǎn)物二氫睪酮的生成速度,此方法特異性強(qiáng),重現(xiàn)性好。以此方法為基礎(chǔ),然后將油菜花粉中提取的不同成分分別加入到酶反應(yīng)體系中,測定酶抑制效果,以抑制率為指標(biāo)篩選油菜花粉中的活性成份。酶從大鼠的睪丸組織中提取,分裝,冷凍干燥保存,由于5α—還原酶存在TYPEⅠ和TYPEⅡ兩種亞型,兩種亞型分別在pH5和pH7的環(huán)境下表現(xiàn)出最大活性,
3、而TYPEⅡ與前列腺增生的關(guān)系更為密切,因此選擇適合TYPEⅡ型5α—還原酶的反應(yīng)體系。實(shí)驗(yàn)研究表明,在油菜花粉的乙醇提取物中發(fā)現(xiàn)有活性成分,經(jīng)過硅膠柱層析分離得到一種黃色的油狀物質(zhì),并在體外再次證實(shí)了酶抑制活性。這種黃色油狀物質(zhì)經(jīng)純度檢查,為單一化合物,經(jīng)GC—MS,NMR鑒定,它是一種多聚醚,其分子量為456,分子式C28H56O4。酶抑制常數(shù)Ki=0.125,同樣方法測得化學(xué)藥非那雄胺的Ki=0.098。油菜花粉中還有多種微量成份
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