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文檔簡(jiǎn)介
1、目的:
以去卵巢所致骨質(zhì)疏松癥大鼠為模型,采用骨組織形態(tài)計(jì)量學(xué)方法,觀(guān)察無(wú)比山藥丸對(duì)其的作用,并從骨形成調(diào)控因子-骨橋蛋白和腎上腺素能受體β-2蛋白的角度,部分揭示其作用機(jī)理,為中醫(yī)藥防治骨質(zhì)疏松癥提供進(jìn)一步的科學(xué)依據(jù)。
方法:
選用雌性SD大鼠77只,先按體重隨機(jī)分為3組:空白對(duì)照組12只,假手術(shù)組12只,造模組53只。造模組大鼠用戊巴比妥鈉麻醉后,摘除雙側(cè)卵巢,假手術(shù)組只摘取卵巢周?chē)僭S脂肪
2、組織。術(shù)后15天,再按體重將造模大鼠隨機(jī)分為4組:模型組13只、雷洛昔芬組13只、無(wú)比山藥丸高劑量組14只、無(wú)比山藥丸低劑量組13只。然后開(kāi)始灌胃給藥:雷洛昔芬組的給藥劑量為5mg/kg;無(wú)比山藥丸高、低劑量組的給藥劑量分別為20g生藥/kg、10g生藥/kg。以上給藥一天一次,連續(xù)6天,休息1天后,再連續(xù)給藥6天,如此給藥13周??瞻讓?duì)照組、假手術(shù)組、模型組按同法灌胃給予等體積的純凈水。
分別在大鼠處死前15d和前3d腹
3、腔注射鹽酸四環(huán)素30mg/kg體重,以對(duì)骨進(jìn)行熒光標(biāo)記。給藥結(jié)束后,用45mg/kg體重劑量的戊巴比妥鈉給大鼠腹腔注射麻醉后,迅速將各組大鼠斷頭處死,取右側(cè)脛骨,用4%多聚甲醛溶液固定,制作不脫鈣骨切片,用于骨組織形態(tài)計(jì)量學(xué)檢測(cè)。取左側(cè)脛骨,制作冰凍切片,用于骨髓中骨橋蛋白和腎上腺素能受體β-2蛋白表達(dá)的檢測(cè)。
統(tǒng)計(jì)學(xué)方法:所得實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差((x)±s)表示,采用單因素方差分析,組間兩兩比較采用LSD法。
4、 結(jié)果:
1、無(wú)比山藥丸對(duì)去卵巢大鼠骨組織形態(tài)計(jì)量學(xué)指標(biāo)的影響。
1.1、無(wú)比山藥丸對(duì)去卵巢大鼠脛骨TBV%的影響。
模型組及各給藥組大鼠脛骨TBV%較假手術(shù)組顯著降低。與模型組比較,無(wú)比山藥丸高、低劑量組TBV%顯著升高;無(wú)比山藥丸高、低劑量組之間比較無(wú)顯著性差異。陽(yáng)性對(duì)照(雷洛昔芬)組的TBV%顯著高于模型組。
1.2、無(wú)比山藥丸對(duì)去卵巢大鼠脛骨TRS%的影響。
5、 模型組、無(wú)比山藥丸高、低劑量組和雷洛昔芬組與假手術(shù)組比較,表示骨吸收參數(shù)的TRS%顯著升高;而與模型組比較,無(wú)比山藥丸高、低劑量組和雷洛昔芬組的TRS%皆顯著降低。
1.3、無(wú)比山藥丸對(duì)去卵巢大鼠脛骨TFS%的影響。
與假手術(shù)組比較,模型組、無(wú)比山藥丸高、低劑量組和雷洛昔芬組大鼠脛骨TFS%明顯升高;而無(wú)比山藥丸高、低劑量組和雷洛昔芬組的TFS%均低于模型組。
1.4、無(wú)比山藥丸對(duì)去卵巢大
6、鼠脛骨MAR的影響。
模型組、無(wú)比山藥丸高、低劑量組和雷洛昔芬組大鼠脛骨MAR較假手術(shù)組明顯升高;而與模型組相比,無(wú)比山藥丸高、低劑量組和雷洛昔芬組的MAR均降低。
1.5、無(wú)比山藥丸對(duì)去卵巢大鼠脛骨mAR的影響。
與假手術(shù)組比較,模型組大鼠脛骨的mAR明顯增高。無(wú)比山藥丸高劑量組mAR與模型組相比明顯降低;無(wú)比山藥丸低劑量組mAR與模型組相比無(wú)顯著性差異。與模型組比較,雷洛昔芬組mAR顯著降低
7、;與假手術(shù)組相比,雷洛昔芬組mAR無(wú)顯著差異。
1.6、無(wú)比山藥丸對(duì)去卵巢大鼠脛骨OSW的影響。
模型組大鼠脛骨的OSW較假手術(shù)組明顯增高。無(wú)比山藥丸高、低劑量組OSW與模型組相比無(wú)顯著性差異。雷洛昔芬組的OSW與模型組比較顯著降低,與假手術(shù)組相比無(wú)顯著差異。
2、無(wú)比山藥丸對(duì)去卵巢大鼠骨髓中OPN蛋白表達(dá)的影響
模型組大鼠脛骨骨髓中OPN蛋白表達(dá)陽(yáng)性面積顯著高于假手術(shù)組。與模型組
8、比較,無(wú)比山藥丸高、低劑量組以及雷洛昔芬組的OPN蛋白表達(dá)陽(yáng)性面積明顯減少;而與假手術(shù)組比較,高、低劑量組明顯增加,雷洛昔芬組無(wú)顯著性差異。高劑量組的OPN蛋白表達(dá)陽(yáng)性面積明顯低于低劑量組。
3、無(wú)比山藥丸對(duì)去卵巢大鼠骨髓中ARβ2蛋白表達(dá)的影響。
與假手術(shù)組比較,模型組大鼠脛骨骨髓中ARβ2蛋白表達(dá)陽(yáng)性面積顯著上調(diào)。無(wú)比山藥丸高、低劑量組及雷洛昔芬組的ARβ2蛋白表達(dá)較模型組有明顯下調(diào);低劑量組的ARβ2蛋
9、白表達(dá)較假手術(shù)組有顯著上調(diào),高劑量組與雷洛昔芬組與假手術(shù)組無(wú)顯著性差異。
與空白對(duì)照組比較,假手術(shù)組的上述指標(biāo)均無(wú)顯著性差異,從而排除了手術(shù)因素對(duì)實(shí)驗(yàn)的影響。
結(jié)論:
1、摘除大鼠卵巢15周后,作為衡量骨量主要標(biāo)志的大鼠脛骨TBV%顯著減少,而代表骨吸收參數(shù)的TRS%以及代表骨形成參數(shù)的TFS%、MAR、mAR和OSW均顯著增加,表明卵巢切除所造成的是一種骨吸收大于骨形成的高轉(zhuǎn)換型骨質(zhì)疏松癥。而
10、除無(wú)比山藥丸高、低劑量對(duì)OSW以及低劑量對(duì)mAR無(wú)明顯影響外,該藥的高、低劑量均能使上述指標(biāo)在一定程度上發(fā)生逆轉(zhuǎn)。說(shuō)明無(wú)比山藥丸能抑制骨的高轉(zhuǎn)換,對(duì)去卵巢所致的骨質(zhì)疏松癥具有一定的預(yù)防作用。
2、摘除大鼠卵巢15周后,大鼠脛骨骨髓中OPN和ARβ2蛋白表達(dá)均顯著上調(diào),表明OPN和ARβ2在骨質(zhì)疏松發(fā)生過(guò)程中起著重要的作用;而無(wú)比山藥丸能使它們的蛋白表達(dá)顯著下調(diào)。這一結(jié)果提示,能夠下調(diào)OPN和ARβ2的蛋白表達(dá)是無(wú)比山藥丸對(duì)
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