應(yīng)用SELDI-TOF-MS篩選卵巢癌血清生物標(biāo)志物.pdf

1、背景與目的： 卵巢癌(上皮性癌)是病死率最高的婦科惡性腫瘤。盡管近年來卵巢癌的手術(shù)和化療有了長足進(jìn)步，但其總體生存率仍無明顯改善。主要原因：一是由于病變早期患者常無自覺癥狀，且卵巢位于盆腔深部，常規(guī)體檢不易發(fā)現(xiàn)異常，導(dǎo)致70％以上的卵巢癌確診時已屆晚期；二是雖然很多患者初治有效，但病變往往在一個相當(dāng)短的疾病緩解期后復(fù)發(fā)或者出現(xiàn)疾病進(jìn)展。因此若能尋找到卵巢癌的早期診斷方法，對臨床療效進(jìn)行有效監(jiān)測并進(jìn)而預(yù)警復(fù)發(fā)和/或轉(zhuǎn)移，將大大提

2、高卵巢癌患者的總體生存率。 目前在卵巢癌早期診斷和療效監(jiān)測方面存在諸多困難：卵巢癌診斷主要通過臨床體檢、超聲檢查和血清標(biāo)志物檢測。癌抗原125(caneer antigen 125．CAl25)是廣泛應(yīng)用于卵巢癌檢測的生物學(xué)指標(biāo)，晚期卵巢癌陽性率可達(dá)80％以上，但I(xiàn)期卵巢癌僅有50％～60％的患者血清CAl25值升高，單用CAl25診斷卵巢癌的陽性率<10％，聯(lián)合超聲也只能將診斷陽性率提高到20％；在療效評價和預(yù)測復(fù)發(fā)方面，

3、CAl25亦是有效指標(biāo)，但尚有15％左右的患者CAl25并不隨疾病進(jìn)展而相應(yīng)升高。 生物標(biāo)志物在腫瘤診斷、療效評價及復(fù)發(fā)監(jiān)測等方面具有重要地位?；蛲蛔?，轉(zhuǎn)錄和翻譯產(chǎn)物的變化都可能成為疾病的潛在特異性標(biāo)志物。然而，基因轉(zhuǎn)錄和翻譯水平的表達(dá)與蛋白質(zhì)豐度并不完全一致，基因測序或基因表達(dá)定量方面的研究成果并不能預(yù)測蛋白質(zhì)的表達(dá)水平及其功能。因此，鑒定細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)、功能以及相互作用是后基因組時代的一項重要任務(wù)，而闡明患者體液中

4、蛋白質(zhì)組學(xué)的變化，找出特異性標(biāo)志物，將有利于腫瘤早期診治。血清、尿液、腦脊液等可用于測定蛋白質(zhì)組成，而且這些樣品的采集是無創(chuàng)或微創(chuàng)的，人們迫切要求對這些樣品中表達(dá)的蛋白質(zhì)進(jìn)行分析，找出疾病相關(guān)性蛋白質(zhì)來用于疾病的診斷和篩選。然而，利用傳統(tǒng)方法對腫瘤相關(guān)蛋白進(jìn)行識別和分析是相當(dāng)復(fù)雜的過程。雙向電泳(two-dimensional electrophoresis，2-DE)、色譜技術(shù)等已被證明是蛋白質(zhì)組學(xué)研究的有效方法，但受到技術(shù)條件要求

5、高、步驟繁瑣、耗時冗長等因素的限制，不適用于大規(guī)模篩選和臨床標(biāo)本檢測。 表面增強激光解吸電離飛行時間質(zhì)譜(surface-enhanced laser desorption/ionization time 0fflight mass spectrometry，SELDI-TOF-MS)是近幾年發(fā)展起來的一種新的蛋白質(zhì)組學(xué)研究方法，融合了質(zhì)譜和芯片兩大技術(shù)的優(yōu)點，具有高通量、高靈敏度等特點，能對樣品中蛋白質(zhì)進(jìn)行全景式分析，進(jìn)而同時

6、發(fā)現(xiàn)多個特異性標(biāo)志物，為腫瘤早期診斷、療效監(jiān)測等提供了嶄新的技術(shù)平臺。本課題擬通過分析卵巢癌與對照組血清中的差異表達(dá)蛋白來篩選卵巢癌診斷標(biāo)志物，通過比較卵巢癌治療前后血清蛋白表達(dá)圖譜的變化來尋找治療相關(guān)標(biāo)志物。 結(jié)論： 1．應(yīng)用SELDI-TOF-MS技術(shù)獲得卵巢癌血清蛋白質(zhì)表達(dá)圖譜的實驗方法穩(wěn)定可靠，具有良好的重復(fù)性。 2．M/z 6195，6311，6366，11 498的4個候選生物標(biāo)志物可正確區(qū)分

7、卵巢癌與健康人。 3．由4個生物標(biāo)志物特定組合構(gòu)成的診斷模型檢測卵巢癌的敏感性和特異性均優(yōu)于CAl25檢測。 4．M/z 4475的蛋白峰可能為化療誘導(dǎo)產(chǎn)生，可作為卵巢癌療效監(jiān)測的新的候選生物標(biāo)志物。 主要創(chuàng)新點： 1．應(yīng)用WCX2蛋白芯片篩選出4個有別于國際上其他相關(guān)報道的血清生物標(biāo)志物，該4個生物標(biāo)志物組成的診斷模型在卵巢癌檢測方面具有良好效果。 2．首次探討血清蛋白質(zhì)圖譜在卵