通心絡(luò)對糖尿病大鼠腦缺血后神經(jīng)生長因子及腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子表達(dá)的研究.pdf

1、前言: 糖尿病是一種慢性代謝性疾病，并發(fā)缺血性卒中易給患者造成較嚴(yán)重的神經(jīng)功能缺損。目前研究證明神經(jīng)細(xì)胞凋亡是其重要的病理環(huán)節(jié)，抑制凋亡的發(fā)生可以減輕神經(jīng)損傷。 神經(jīng)生長因子(NGF)、腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(BDNF)是一類小分子多肽物質(zhì)，在神經(jīng)系統(tǒng)損傷的情況下具有神經(jīng)保護(hù)與修復(fù)的作用，同時(shí)抑制細(xì)胞凋亡。 通心絡(luò)膠囊具有益氣活血、通絡(luò)止痛之功效。對急性腦梗死的多個(gè)病理環(huán)節(jié)起不同程度的干預(yù)作用。 本研究通過進(jìn)

2、行通心絡(luò)干預(yù)之后，觀察局灶性腦缺血糖尿病大鼠的神經(jīng)功能和缺血周邊區(qū)神經(jīng)細(xì)胞凋亡數(shù)及NGF、BDNF蛋白表達(dá)的變化，探討通心絡(luò)干預(yù)對糖尿病合并腦缺血的神經(jīng)保護(hù)作用及其機(jī)制。 材料與方法: 1、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組 選用體重200-250g Wistar大鼠，2次給藥法制備大鼠糖尿病模型，以空腹血糖≥16.7mmol/L作為糖尿病大鼠；6周后采用線栓法建立大鼠大腦中動(dòng)脈閉塞(MCAO)模型。大鼠蘇醒后表現(xiàn)為提尾時(shí)右側(cè)前肢內(nèi)

3、收屈曲、爬行時(shí)向右側(cè)劃圈者入選。模型建立后，選取30只大鼠隨機(jī)分成對照組、通心絡(luò)組，每組又分1d、7d、14d3個(gè)時(shí)間點(diǎn)，每一時(shí)間點(diǎn)均為5只大鼠。通心絡(luò)組給于通心絡(luò)膠囊劑量為1.0g/kd/d，所用藥物溶于生理鹽水以4ml/kg灌胃，對照組每天灌胃等量的生理鹽水。 2、神經(jīng)功能缺損評分 采用Chen等制定的神經(jīng)功能評分標(biāo)準(zhǔn)(mNSS)分別于術(shù)后1d、7d及14d對大鼠進(jìn)行神經(jīng)功能評分。 3、免疫組化法檢測

4、 NGF、BDNF的表達(dá)各組于術(shù)后1d、7d、14d分別處死5只大鼠，經(jīng)心內(nèi)灌注，斷頭取腦，浸蠟包埋，免疫組化法檢測NGF、BDNF的表達(dá)。 4、TUNEL染色方法 檢測細(xì)胞凋亡情況石蠟切片按照TUNEL(Roche)試劑盒說明書操作，進(jìn)行細(xì)胞凋亡染色。 5、圖像分析 每個(gè)標(biāo)本取兩張切片，分別在高倍鏡(400×)下隨機(jī)觀察缺血側(cè)額頂葉及紋狀體區(qū)不重疊的5個(gè)高倍視野，顯微圖像分析系統(tǒng)采集圖像，細(xì)胞漿中呈棕黃

5、色顆粒者為陽性細(xì)胞，計(jì)數(shù)陽性細(xì)胞數(shù)，取其平均數(shù)。TUNEL：細(xì)胞核中有棕黃色顆粒者為陽性細(xì)胞，計(jì)數(shù)凋亡細(xì)胞數(shù)。 6、統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 各組計(jì)量資料數(shù)據(jù)均以x-±s表示，采用SPSS13統(tǒng)計(jì)軟件以陽性染色細(xì)胞數(shù)平均數(shù)作為指標(biāo)計(jì)數(shù)，進(jìn)行兩樣本均數(shù)的t檢驗(yàn)，P<0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果： 1、神經(jīng)功能評分結(jié)果術(shù)后1d時(shí)各組神經(jīng)功能評分無顯著差異；7d、14d后通心絡(luò)干預(yù)組神經(jīng)功能評分低于對照組。 2、

6、BDNP及NGF的表達(dá)BDNF及NGF在局灶性腦缺血早期在大腦皮質(zhì)即出現(xiàn)表達(dá)增強(qiáng)，于1d達(dá)高峰，在以后的時(shí)間點(diǎn)逐漸下降。統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示通心絡(luò)組缺血周邊區(qū)BDNF及NGF蛋白免疫陽性細(xì)胞高于對照組。 3、TUNEL染色結(jié)果通心絡(luò)干預(yù)組和對照組糖尿病大鼠在缺血周邊區(qū)均有TUNEL免疫陽性細(xì)胞的存在，并與壞死細(xì)胞相互混雜。統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示通心絡(luò)組缺血周邊區(qū)TUNEL免疫陽性細(xì)胞數(shù)低于對照組。 結(jié)論： 腦缺血損傷后NGF、BD