左炔諾孕酮對人子宮肌瘤細胞體外增殖與凋亡的影響及機理研究.pdf

1、子宮肌瘤是女性生殖器官的常見腫瘤，其發(fā)生與細胞增殖及細胞凋亡的失衡有關。近年來，隨著對子宮肌瘤病因學研究的進展，局部應用孕激素類藥物的治療方法備受關注。左炔諾孕酮宮內緩釋系統(tǒng)(LNG-IUS)是當前國際公認性能優(yōu)良的宮內抗生育系統(tǒng)。國外一項前瞻性自身對照研究發(fā)現(xiàn)使用LNG-IUS能使肌瘤患者的子宮肌瘤變小，經量減少，其對子宮肌瘤的治療作用可能與抑制內膜生長有關。然而LNG-IUS所形成的局部高效孕激素環(huán)境，是否還存在其它治療作用靶點和機

2、制尚不清楚。本研究首先構建純度高、穩(wěn)定性好的人子宮平滑肌瘤原代培養(yǎng)細胞，并在此基礎上，直接以其為作用靶標，從增殖與凋亡的角度探討左炔諾孕酮對子宮肌瘤的作用及其相關機制。研究共分三部分： 一、人子宮平滑肌瘤細胞的原代培養(yǎng)與鑒定采用貼塊法和酶消化法均成功獲得肌瘤細胞。采用貼塊法的第7～10d始見單個細胞從組織塊邊緣游出，半月左右細胞長滿并可傳代；應用酶消化法時，不同肌瘤所需的消化時間稍有差異，消化所得的細胞經臺盼藍染色，活率可達90

3、％。光鏡下肌瘤細胞呈梭形，核橢圓形，可呈典型“峰一谷”樣生長。原代與第3、9代細胞的倍增時間之間無統(tǒng)計學差異。免疫組化檢測α-SMA陽性細胞達95％以上。以上結果表明，貼塊法和酶消化法均能獲得大量高純度，功能良好，性狀穩(wěn)定的肌瘤細胞。 二、左炔諾孕酮對人子宮肌瘤細胞體外增殖與凋亡的影響MTT結果顯示，10μg/mL LNG開始抑制肌瘤細胞的生長，隨濃度增加及時間延長，抑制作用加強；電鏡觀察20μg/mL LNG組細胞，胞質空泡化

4、、內質網擴張、線粒體固縮、染色質濃縮邊聚；流式細胞術分析，加藥組細胞凋亡率隨LNG濃度的增加而逐漸升高；AO/EB雙染在熒光顯微鏡下觀察，對照組無明顯凋亡細胞，10μg/mL LNG組開始出現(xiàn)早期凋亡細胞，15μg/mL、20μg/mL、25μg/mL LNG組晚期凋亡細胞逐漸增多，核濃聚、偏位、被染成桔紅色，可見明顯的凋亡小體。這說明，10μg/mL LNG開始于體外發(fā)揮抑制肌瘤細胞增殖并誘導其凋亡的效應。 三、左炔諾孕酮抑制

5、體外培養(yǎng)人子宮肌瘤細胞增殖及誘導凋亡的機制研究RT-PCR結果顯示，10μg/mL以上LNG作用后，肌瘤細胞中IGF-I、Survivin mRNA表達顯著下降(P<0.05)；Western blot證實，10μg/mL和20 μg/mL LNG作用后，Survivin蛋白表達量顯著下降，p38磷酸化水平升高，Caspase 3被明顯激活。由此可以推測，高濃度LNG對子宮肌瘤的治療機制可能與降調IGF-I表達，抑制Survivin抗凋