乳化異氟醚對(duì)乳鼠心肌細(xì)胞缺氧-復(fù)氧損傷的保護(hù)作用及凋亡相關(guān)基因表達(dá)的影響.pdf

1、目的：觀察乳化異氟醚(Emulsifled isofurane，EI，8％體積分?jǐn)?shù))對(duì)培養(yǎng)乳鼠心肌細(xì)胞模擬缺血再灌注損傷后心肌細(xì)胞的保護(hù)作用，并對(duì)其可能的機(jī)制進(jìn)行探討，為EI以后在臨床的研究及應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法：利用原代培養(yǎng)的wister乳鼠心肌細(xì)胞建立模擬心肌缺血再灌注模型，分對(duì)照組(不加藥物處理，常氧條件下培養(yǎng)6h)、模型(H/R)組(不加藥物處理，缺氧3h后復(fù)氧3h)、脂肪乳組(在培養(yǎng)基中加入脂肪乳干預(yù)2h，余同H/

2、R組)和EI組(在培養(yǎng)基中加入EI干預(yù)2h，余同H/R組)。各組心肌細(xì)胞做相應(yīng)分組處理后，利用倒置顯微鏡觀察心肌細(xì)胞的生長(zhǎng)狀態(tài)和搏動(dòng)頻率，并用透射電鏡觀察細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)改變；XTT比色法測(cè)定細(xì)胞存活率；收集心肌細(xì)胞行超聲粉碎，離心取上清，按照試劑盒說(shuō)明，黃嘌呤氧化酶法測(cè)定超氧化物歧化酶(SOD)活性，硫代巴比妥酸顯色法測(cè)定丙二醛(MDA)含量，并測(cè)定缺氧復(fù)氧后細(xì)胞培養(yǎng)液中乳酸脫氫酶(LDH)活性；流式細(xì)胞儀檢測(cè)心肌細(xì)胞凋亡率；RT-PCR

3、檢測(cè)心肌細(xì)胞凋亡基因bcl-2 mRNA、bax mRNA的表達(dá)；Western blot定量檢測(cè)Bcl-2、Bax蛋白的表達(dá)。 結(jié)果： 1.心肌細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察：心肌細(xì)胞培養(yǎng)24h出現(xiàn)自發(fā)性搏動(dòng)，72h后聚集成簇，呈現(xiàn)頻率為80-100次/min的同步節(jié)律性搏動(dòng)。細(xì)胞形態(tài)呈梭形或不規(guī)則三角形，偽足明顯，可發(fā)生相互融合，且其超微結(jié)構(gòu)完整、清楚。H/R后心肌細(xì)胞皺縮變圓，偽足減少，細(xì)胞搏幅減弱、頻率減慢甚至出現(xiàn)停搏，超微結(jié)構(gòu)

4、出現(xiàn)線粒體腫脹，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)空泡等改變。 EI和脂肪乳組對(duì)H/R心肌細(xì)胞的形態(tài)和超微結(jié)構(gòu)都有明顯改善。 2 各組心肌細(xì)胞存活率比較：與對(duì)照組比較，其余各組心肌細(xì)胞存活率均降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；而與H/R組比較，EI組和脂肪乳組心肌細(xì)胞存活率明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。 3.各組心肌細(xì)胞SOD、LDH活性與MDA含量的比較：與對(duì)照組比較，H/R組細(xì)胞SOD下降，MDA和LDH升高(均P＜0.05

5、)。EI組與H/R組比較，心肌細(xì)胞SOD活性提高，MDA和LDH含量降低(均P＜0.05)。 4 EI和脂肪乳均可顯著降低H/R損傷心肌細(xì)胞的凋亡率(均P＜0.05)，但EI組與脂肪乳組比較降低更明顯(均P＜0.05)；EI可顯著上調(diào)Bcl-2表達(dá)(P＜0.05)、下調(diào)Bax表達(dá)(P＜0.05)；脂肪乳對(duì)Bcl-2和Bax表達(dá)無(wú)影響(P＞0.05)。 結(jié)論： 1.H/R對(duì)體外培養(yǎng)乳鼠心肌細(xì)胞可以造成明顯的損傷，表

6、現(xiàn)為細(xì)胞存活率降低，心肌酶的漏出，氧自由基的產(chǎn)生增加，心肌細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)改變，心肌細(xì)胞凋亡率增加等。 2.乳化異氟醚對(duì)體外培養(yǎng)乳鼠心肌細(xì)胞H/R損傷具有保護(hù)作用，表現(xiàn)為能提高細(xì)胞存活率，減少心肌酶的漏出，抑制氧自由基產(chǎn)生，維持心肌細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)完整，抑制心肌細(xì)胞凋亡，促進(jìn)復(fù)氧時(shí)心肌細(xì)胞功能的恢復(fù)等。 3.乳化異氟醚對(duì)體外培養(yǎng)乳鼠心肌細(xì)胞H/R損傷的保護(hù)作用機(jī)制可能與其抗自由基損傷、bcl-2基因表達(dá)上調(diào)和bax基因表達(dá)下調(diào)有