野油菜黃單胞菌野油菜致病變種致病相關(guān)基因的鑒定及分析.pdf

1、野油菜黃單胞菌野油菜致病變種(簡稱Xcc)是十字花科植物重要的病原細(xì)菌，能廣泛的引起十字花科作物的黑腐病。Xcc侵染寄主植物的過程是非常復(fù)雜的，一般經(jīng)過吸附-識(shí)別-侵入-繁殖-定殖-擴(kuò)展-顯癥7個(gè)過程，而且每一個(gè)過程都有相應(yīng)的基因參與；Daniels預(yù)測大約有20～100個(gè)基因參與Xcc的致病過程，而目前已經(jīng)實(shí)驗(yàn)證實(shí)的致病相關(guān)基因大約有60多個(gè)?？墒歉鶕?jù)野油菜黃單胞菌野油菜致病變種8004菌株基因組數(shù)據(jù)，預(yù)測的致病相關(guān)基因有250多個(gè)。

2、由此可見在該病原菌中，尚有許多未知的致病相關(guān)基因有待人們?nèi)ヨb定。目前，尋找致病相關(guān)新基因的方法主要有3種：一是構(gòu)建突變體的方法，該方法是通過構(gòu)建病原菌基因組中每一個(gè)基因的突變體，然后進(jìn)行致病性檢測；二是基因差別表達(dá)的方法，該方法是通過GUS報(bào)告系統(tǒng)或通過DNA芯片雜交檢測在豐富培養(yǎng)基中和寄主體內(nèi)或模仿寄主體內(nèi)環(huán)境條件的培養(yǎng)基的基因表達(dá)差異，一般將那些受寄主誘導(dǎo)的基因作為致病相關(guān)基因的候選基因；三是生物信息學(xué)分析法，該方法通過在病原菌基因

3、組中尋找和已報(bào)道的其他病原菌的致病相關(guān)基因的同源基因作為該病原菌的致病相關(guān)基因的候選基因。本研究采用了第一和第三種方法進(jìn)行Xcc致病相關(guān)新基因的鑒定。首先，在本實(shí)驗(yàn)已經(jīng)構(gòu)建了Xcc8004的Tn5gusA5插入突變體庫并對所有突變體進(jìn)行了致病性檢測的前提下，我們利用標(biāo)記置換(marker exchange)的方法對10個(gè)致病力下降的Tn5gusA5插入突變體重新構(gòu)建突變體，證實(shí)2個(gè)與Xcc致病相關(guān)的插入位點(diǎn)，通過進(jìn)一步的非極性突變體的構(gòu)