熱休克蛋白70在炎性牙髓組織中的免疫組化表達及意義.pdf

1、[目的]：采用“二步法”免疫組化法研究鼠牙髓在程度不同的機械性鉆磨損傷刺激(淺磨、深磨、穿髓)后以及人牙髓在不同程度的齲源性因素刺激(淺齲、深齲、急、慢性牙髓炎)后HSP70的免疫定位；探討在外界刺激因素不同的情況下HSP70在鼠及人的牙髓中是否有相同的動態(tài)表達；推測在牙髓受到外界刺激過程中HSP70所起的修復和應激保護能力。 [方法]： 一、選取wistar大鼠，雄性，24只，體重200～280克左右，根據(jù)不同的處理時

2、間將24只大鼠隨機分為6組，每組4只，即正常組、淺磨24h組、深磨24h組、穿髓24h組、穿髓3d組和穿髓7d組。麻醉后仰臥固定，用備好的高速渦淪鉆分別在大鼠左右上頜第一磨牙合面進行機械性鉆磨(淺磨組磨除釉質(zhì)0.3mm，深磨組磨除釉質(zhì)牙本質(zhì)厚度0.7mm，穿髓組深度不宜超過1mm，并用探針刺探見出血點即可)。各組鼠分別按規(guī)定時間脫頸處死，迅速將左右側上頜第一磨牙及周圍牙槽骨的組織塊放入10％福爾馬林溶液(PH7.4)，4℃固定，脫鈣、脫

3、水、石蠟包埋。各標本作5um厚的石蠟切片，分別進行HE染色和免疫組化染色后，光鏡觀察并進行圖象分析。 二、應用HSP70鼠抗人單克隆抗體，分別對10例健康牙髓、淺齲患牙牙髓、深齲患牙牙髓、急性牙髓炎和慢性牙髓炎5組牙髓進行HE染色和免疫組化染色，(所有標本取臨床因阻生或正畸拔除的健康第三磨牙或前磨牙的牙髓和確診存在炎癥的第三磨牙牙髓)對HSP70進行免疫定位和分析。 [結果]：在對大鼠磨牙機械性鉆磨損傷過程中，淺磨24h

4、組和對照組HSP70在牙髓組織中只有個別標本可見弱陽性著色，與后四組相比(P＜0.01)。深磨24h組可見成牙本質(zhì)細胞成纖維細胞陽性表達，血管內(nèi)皮細胞弱陽性表達。穿髓24h組和3d組表現(xiàn)為急性炎癥反應，HSP70在成牙本質(zhì)細胞、血管內(nèi)皮細胞、中性粒細胞中均呈強陽性表達，成纖維細胞呈陽性表達。至穿髓7d時為弱陽性表達，可能為修復期所致。 人牙髓標本結果顯示①人牙髓在齲源性刺激(淺齲、深齲、急慢性牙髓炎)后同正常組牙髓相比其HE染色

5、可觀察到淺齲組變化不大，個別標本可見少量炎細胞浸潤。其它組可觀察到成牙本質(zhì)細胞排列紊亂，牙髓的炎細胞浸潤伴毛細血管擴張，有時可見修復性牙本質(zhì)的形成和牙髓壞死的組織病理變化。②免疫組化染色可見HSP70在健康牙髓和淺齲牙髓中只有個別標本弱陽性表達，深齲組可見成牙本質(zhì)細胞、成纖維細胞陽性表達。血管內(nèi)皮細胞弱陽性表達。急性牙髓炎組牙髓細胞均呈強陽性表達，其中可見中性粒細胞呈強陽性表達顯著。慢性牙髓炎組亦呈陽性染色，但染色程度不一致，總體偏弱。