骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)腎癌裸鼠皮下移植瘤的影響.pdf

1、廈門(mén)大學(xué)學(xué)位論文原創(chuàng)性聲明本人呈交的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下，獨(dú)立完成的研究成果。本人在論文寫(xiě)作中參考其他個(gè)人或集體已經(jīng)發(fā)表的研究成果，均在文中以適當(dāng)方式明確標(biāo)明，并符合法律規(guī)范和《廈門(mén)大學(xué)研究生學(xué)術(shù)活動(dòng)規(guī)范(試行)》。另外，該學(xué)位論文為()課題(組)的研究成果，獲得()課題(組)經(jīng)費(fèi)或?qū)嶒?yàn)室的資助，在()實(shí)驗(yàn)室完成。(請(qǐng)?jiān)谝陨侠ㄌ?hào)內(nèi)填寫(xiě)課題或課題組負(fù)責(zé)人或?qū)嶒?yàn)室名稱，未有此項(xiàng)聲明內(nèi)容的，可以不作特別聲明。)聲明人(簽名)：嬲k體年與

2、月勿日摘要摘要目的：研究骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(mesenchymalstemcells，MSC)對(duì)A498腎癌裸鼠移植瘤的影響。方法：培養(yǎng)腎癌A498細(xì)胞和人MSC，用CMDil標(biāo)記MSC并對(duì)標(biāo)記后MSC細(xì)胞的活性和增殖能力進(jìn)行比較，構(gòu)建A498腎癌裸鼠皮下移植瘤模型，實(shí)驗(yàn)裸鼠共36只，當(dāng)裸鼠移植瘤長(zhǎng)徑達(dá)05～08cm，將其隨機(jī)分為2組：一組注射CM—Dil標(biāo)記的MSC(MSC組)，另一組注射生理鹽水(NS對(duì)照組)，其中，每組各有6只j于觀

3、察生存期。從接種腫瘤的第1天起，隔天觀察裸鼠飲食、排便、活動(dòng)狀況以及腫瘤的生長(zhǎng)情況；在注射MSC之后的不同時(shí)間段(3天，6天，15天，30天)用游標(biāo)卡尺測(cè)量裸鼠皮下移植瘤的長(zhǎng)徑、短徑，并計(jì)算皮下移植瘤體積，記錄注射當(dāng)天開(kāi)始至裸鼠死亡的時(shí)間，計(jì)算各組裸鼠平均生存時(shí)間，比較兩組裸鼠生存時(shí)間差異。分別在MSC注射接種后的3天，6天，15天，30天，將MSC組和NS對(duì)照組裸鼠各處死3只，留取MSC組皮下移植瘤組織冰凍切片，在熒光顯微鏡下，觀察C

4、M—Dil標(biāo)記的MSC在不同的時(shí)間點(diǎn)裸鼠腫瘤組織中的分布情況；蘇木素一伊紅(hematoxylin—esosin，HE)染色后行HE染色病理學(xué)觀察。取各組小鼠上述時(shí)間點(diǎn)的腫瘤組織切片，用RTPCR和WesternBlot分別檢測(cè)Twist基因和蛋白的表達(dá)情況。結(jié)果：CMDil標(biāo)記的MSC活性和增殖與未標(biāo)記的MSC無(wú)明顯改變；MSC組裸鼠皮下移植痛在注射后15天內(nèi)增長(zhǎng)緩慢，與NS對(duì)照組比較有顯著差異(P005)：MSC組裸鼠的生存期延長(zhǎng)；

5、熒光冰凍切片追蹤裸鼠腫瘤組織中CM—Dil標(biāo)記的MSC，熒光顯微鏡下觀測(cè)到CMDil標(biāo)記的MSC在綠色熒光激發(fā)下，細(xì)胞膜呈明亮的橙紅色，細(xì)胞質(zhì)與細(xì)胞核呈類圓形暗區(qū)，隨著時(shí)間的推移，熒光亮度逐漸變?nèi)?，熒光范圍也逐漸縮??；HE染色結(jié)果顯示MSC組炎癥反應(yīng)較NS對(duì)照輕；Twist基因以及Twist蛋白在MSC組的表達(dá)明顯比NS組少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(氏005)。結(jié)論：骨髓問(wèn)充質(zhì)干細(xì)胞移植顯著抑制A498腎癌裸鼠移植瘤的生長(zhǎng)，并延遲受體裸鼠的生