p52SHC3及其結構域?qū)C12細胞周期的影響.pdf

1、目的：SHC3蛋白屬于Shc家族，Shc家族包括SHC1、SHC2、SHC3和SHC4四種蛋白。SHC1(又稱ShcA或Shc)發(fā)現(xiàn)最早，在哺乳動物的組織中廣泛表達，但不存在于成熟的神經(jīng)元中；SHC2(又稱ShcB)在神經(jīng)系統(tǒng)中廣泛存在，但在其他組織中不表達；SHC3(又稱N-Shc、ShcC和Rai)只在成熟的神經(jīng)元中表達，在其它組織中不表達；SHC4(又稱ShcD)是新近發(fā)現(xiàn)的成員，在骨骼肌中表達，其它組織中的表達情況還不清楚。Sh

2、c家族都含有兩種功能性結構域：能和磷酸化酪氨酸結合的PTB結構域和SH2結構域以及一個含有磷酸化酪氨酸的中央?yún)^(qū)域結構域CH1。PTB結構域和SH2結構域都可以和活化的酪氨酸激酶受體結合，CH1結構域則被認為可以和Grb2結合，參與下游的信號通路，也有人認為CH1結構域可以將Shc蛋白定位于細胞膜上，不經(jīng)Grb2即可傳遞上游信號。SHC3蛋白有兩種異構體，p66SHC3和p52SHC3，兩者只是在N-末端不同。和p52SHC3相比，p66

3、SHC3多了一個類似于中央?yún)^(qū)結構域的CH2結構域。有研究認為SHC3可以促進神經(jīng)前體細胞的分化，維持神經(jīng)前體細胞和神經(jīng)元的存活，但是SHC3對可分裂細胞周期的影響還沒有人研究過。本項研究旨在通過對p52SHC3及其結構域?qū)C12細胞周期的影響，探討p52SHC3及其結構域?qū)ζ渌煞至鸭毎芷诘挠绊?，進一步了解p52SHC3及其不同結構域的功能。 方法：應用Western Blot技術驗證SHC3在大鼠大腦、肺、肝和心臟等不同組

4、織中的分布，將p52SHC3全長及其PTB結構域、SH2結構域、PTB+CH1結構域和CH1+SH2結構域插入載體pEGFP-N1中，構建其真核表達載體，使用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染的方法，將構建好的含有p52SHC3全長及其PTB結構域、SH2結構域、PTB+CH1結構域和CH1+SH2結構域的表達載體以及空載體轉(zhuǎn)染進PC12細胞中，在轉(zhuǎn)染后36h和60h，使用流式細胞術檢測GFP陽性的細胞中G0/G1期的細胞所占的百分比。 結果：p52S

5、HC3在大鼠的大腦中表達量比較高，在大鼠的肺、肝和心臟中則沒有表達；流式細胞術檢測的結果顯示，和轉(zhuǎn)染空載的PC12細胞相比，轉(zhuǎn)染p52SHC3全長的PC12細胞中，G0/G1期的細胞比例上升，轉(zhuǎn)染PTB結構域和PTB+CH1結構域的PC12細胞中，G0/G1期的細胞所占的比例明顯上升，而CH1+SH2結構域的PC12細胞中，G0/G1期的細胞所占的比例下降，轉(zhuǎn)染SH2結構域的PC12細胞G0/G1期的細胞所占的比例無明顯變化。

6、結論：(1)p52SHC3全長可以抑制PC12細胞的增殖，PTB結構域和PTB+CH1結構域也可以將PC12細胞抑制在G0/G1期，CH1+SH2結構域則可以促進PC12細胞的增殖，SH2結構域?qū)C12細胞周期無明顯作用；(2)p52SHC3有可能是通過其PTB結構域影響可分裂細胞的增殖；(3)PTB結構域?qū)煞至鸭毎芷诘挠绊懣赡懿唤?jīng)過CH1介導的信號通路，但CH1結構域的存在可以明顯提高SH2結構域?qū)煞至鸭毎脑鲋车拇龠M作用。在