犬科動(dòng)物（藍(lán)狐、犬）卵母細(xì)胞體外成熟的研究.pdf

1、本試驗(yàn)對(duì)影響犬科動(dòng)物—發(fā)情期前后的犬、間情期的藍(lán)狐卵母細(xì)胞體外成熟的條件進(jìn)行了優(yōu)化篩選，以便確立犬、藍(lán)狐卵母細(xì)胞體外培養(yǎng)最佳成熟條件。實(shí)驗(yàn)內(nèi)容包括：1)不同血清蛋白及表皮生長(zhǎng)因子對(duì)間情期藍(lán)狐卵母細(xì)胞體外成熟的影響；2)在相同的基礎(chǔ)培養(yǎng)液(M199+10％FBS)中添加不同的激素組合，比較不同的激素對(duì)間情期藍(lán)狐卵母細(xì)胞成熟的影響效果；3)卵巢采集后保存時(shí)間和保存溫度對(duì)間情期藍(lán)狐卵母細(xì)胞體外成熟的影響；4)電刺激對(duì)間情期藍(lán)狐卵母細(xì)胞體外成熟

2、的影響；5)不同的培養(yǎng)液對(duì)發(fā)情期犬卵母細(xì)胞體外成熟的影響。試驗(yàn)證明，藍(lán)狐卵母細(xì)胞在M199+10％FBS+10ng/mlEGF+10IU/mlPMSG+10IU/mlhCG中培養(yǎng)96h時(shí)MⅡ期發(fā)育率極顯著高于其它各組(12.28％)(p＜0.01)。卵母細(xì)胞在培養(yǎng)72h～120h均有MⅡ，但在培養(yǎng)96h時(shí)(12.28％)高于72h和120h(6.67％，7.10％)(P＞0.05)。 藍(lán)狐卵母細(xì)胞在相同的基礎(chǔ)培養(yǎng)液中(M199+

3、10％FBS+10ng/mlEGF)添加不同的激素組合FSH+LH、FSH+hCG、PMSG+hCG、PMSG+hCG(48h后換為無激素)，培養(yǎng)96h時(shí)比較各組卵母細(xì)胞成熟情況。實(shí)驗(yàn)中添加FSH+LH組的MⅡ發(fā)育率(9.92％)與添加其它激素組合相比差異不顯著(P＞0.05)，但明顯高于其它組合。此外，結(jié)果表明添加激素組MⅡ發(fā)育率明顯高于對(duì)照組(3.11％)(P＞0.05)。 藍(lán)狐卵巢離體后保存時(shí)間越長(zhǎng)，獲得卵母細(xì)胞形態(tài)正常率

4、越低。在卵巢保存時(shí)間為5h時(shí)，入孵可用卵(40.01％)極顯著高于保存時(shí)間為10h組(20％)(p＜0.01)；入孵后卵母細(xì)胞MⅡ(9.65％)發(fā)育率高于10h組(7.77％)，但差異不顯著(P＞0.05)。同時(shí)證明，卵巢保存的溫度分別控制在34℃與28℃時(shí)卵母細(xì)胞體外成熟率差異不顯著(P＞0.05)。 藍(lán)狐卵母細(xì)胞在M199+10％FBS+10ng/μlEGF+10IU/mlPMSG+10IU/mlhCG培養(yǎng)96h后，施加不同

5、場(chǎng)強(qiáng)及脈沖時(shí)程的電脈沖刺激后，移入SOF液中繼續(xù)培養(yǎng)48h，觀察其成熟率、孤雌發(fā)育率。結(jié)果表明，施加場(chǎng)強(qiáng)130Vmm-1、脈沖時(shí)程80μs、單次脈沖后卵母細(xì)胞成熟率最高(60.34％)。 發(fā)情期犬卵母細(xì)胞在成熟培養(yǎng)液M199+10ng/mlEGF中(A)液：加有蛋白、激素FBS+FSH+hCG與(B)液：加有能量物質(zhì)PVA，培養(yǎng)48h時(shí)A液中卵母細(xì)胞的成熟率(7.84％)；而B液中卻未發(fā)現(xiàn)成熟的卵母細(xì)胞；培養(yǎng)到72h時(shí)B液中卵母