地霉菌的毛發(fā)穿孔試驗研究和掃描電鏡觀察.pdf

1、目的:地霉菌(Geotrichum)為酵母樣真菌,屬半知菌類、絲孢綱、絲孢目、叢梗孢科,其代表菌種白地霉(Geotrichum candidum),是一種條件致病菌,多引起支氣管感染,偶可致全身播散性感染。林生地霉(Geotircumsivicola)是地霉屬中新發(fā)現(xiàn)的一個種,2002年首次從巴西果蠅和印度柞蠶幼蟲身上分離得到。同年,我科首次從一膿癬患兒皮損中分離得到一株林生地霉。2005年,我科又自一例中毒性表皮壞死松解癥患者的血液中

2、分離出一株林生地霉。李秀麗等從形態(tài)學(xué)、營養(yǎng)生理學(xué)、分子生物學(xué)等各個角度對林生地霉進(jìn)行初步研究,并且通過皮膚感染的動物實驗及毛發(fā)受侵試驗對其致病力進(jìn)行了初步探討。
　　 本研究通過對不同年齡組毛發(fā)進(jìn)行改良毛發(fā)穿孔實驗,一方面在光鏡和電鏡下觀察林生地霉血液株,林生地霉皮損株和白地霉的菌絲及孢子的形態(tài)及其對毛發(fā)破壞的程度,為臨床上診斷地霉所致頭發(fā)的感染提供指導(dǎo)。另一方面比較其對不同年齡組毛發(fā)感染時間的差異,進(jìn)而評價地霉菌對毛發(fā)的侵襲力

3、。
　　 方法:林生地霉系我科保存的經(jīng)中科院微生物研究所鑒定菌種,白地霉購自中科院微生物研究所。將林生地霉血液株、林生地霉皮損株和白地霉分別接種于改良沙堡氏培養(yǎng)基上,在37℃溫箱培養(yǎng)14天,挑取菌落置于生理鹽水中,經(jīng)振蕩分別制備成林生地霉皮損株、林生地霉血液株及白地霉菌懸液,并用血細(xì)胞計數(shù)板將菌懸液中孢子數(shù)控制在108/ml～109/ml范圍備用。取4個年齡組的毛發(fā)(小于2歲、2～13歲、13～19歲、大于19歲)分別置于沙氏葡

4、萄糖蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基,然后在各年齡組毛發(fā)上分別接種林生地霉皮損株、林生地霉血液株及白地霉菌懸液3滴,置于37°溫箱培養(yǎng),并取各年齡組毛發(fā)數(shù)根,不加菌懸液作為空白對照。在接種后2、4、6、7、8、9、10、11周各取數(shù)根毛發(fā)分別用10％KOH和酚棉藍(lán)染色壓片光鏡下觀察菌絲和大分生孢子的形態(tài),毛發(fā)有破壞者進(jìn)一步應(yīng)用日立S23500N掃描電鏡攝片,以觀察林生地霉皮損株、林生地霉血液株和白地霉形態(tài)學(xué)上的差異以及受感染毛發(fā)的結(jié)構(gòu)變化。
　　

5、 結(jié)果:比較林生地霉血液株、林生地霉皮損株和白地霉對不同年齡組毛發(fā)感染時間的差異,以毛發(fā)上有菌絲或孢子附著且毛發(fā)有實質(zhì)損傷為穿孔標(biāo)準(zhǔn)。林生地霉和白地霉均可致毛發(fā)破壞。在每年齡組中,不同菌株間毛發(fā)穿孔時間比較差異有顯著性(P＜0.05),另外無論是皮損株,血液株還是白地霉感染毛發(fā)所需的時間隨著年齡的增長,也隨之延長,經(jīng)統(tǒng)計學(xué)處理有顯著性差異(P＜0.05)。對不同菌株間的差異進(jìn)行兩兩比較,發(fā)現(xiàn)在各年齡組中,林生地霉血液株、皮損株和白地霉

6、的兩兩比較差異均有顯著性(P＜0.05),其中林生地霉血液株的毛發(fā)穿孔時間范圍在53-64天,平均為58.07±3.15天;林生地霉皮損株的毛發(fā)穿孔時間范圍在57-66天,平均為61.05±2.55天;白地霉的毛發(fā)穿孔時間范圍在61-74天,平均為67.11±3.78天。提示林生地霉血液株導(dǎo)致毛發(fā)感染的時間最短,白地霉導(dǎo)致毛發(fā)感染的時間最長,因此林生地霉血液株對毛發(fā)的破壞性較其他兩種菌株強(qiáng)。
　　 對不同年齡組間的差異進(jìn)行兩兩比

7、較,發(fā)現(xiàn)除小于2歲組與2～13歲組之間比較差異無顯著性外(P＞0.05),其余各年齡組的兩兩比較差異均有顯著性,提示年齡越小,毛發(fā)越易被感染。
　　 無論是林生地霉還是白地霉,在光鏡下均可觀察到毛發(fā)邊緣出現(xiàn)毛刷樣改變,破壞嚴(yán)重時毛發(fā)表面可出現(xiàn)鍥形缺損,或毛發(fā)邊緣凹凸不平。光鏡可見較多的矩形、橢圓形關(guān)節(jié)孢子和圓形小分生孢子,豐富的芽生孢子,少量的厚膜孢子、菌絲稀少。在電鏡下觀察,林生地霉對毛發(fā)破壞的程度較白地霉嚴(yán)重,且林生地霉血液

8、株較林生地霉皮損株對毛發(fā)破壞的程度嚴(yán)重。白地霉的菌絲僅附著在毛發(fā)表面并侵入毛小皮的縫隙間,使毛小皮排列稀松、少量脫落,從而造成皮質(zhì)的輕度缺損;而林生地霉皮損株的菌絲嚴(yán)重侵蝕皮質(zhì),使毛小皮大量的破壞和脫落,造成毛發(fā)的片狀缺損,毛干變細(xì);林生地霉血液株的菌絲還可造成毛發(fā)的劈開或斷裂,嚴(yán)重者造成毛發(fā)髓質(zhì)的破壞。
　　 結(jié)論:
　　 1毛發(fā)穿孔試驗陽性表明林生地霉和白地霉均能導(dǎo)致毛發(fā)感染。
　　 2林生地霉較白地霉對毛發(fā)