不同方法誘導(dǎo)去分化脂肪細胞心肌樣細胞分化的實驗研究.pdf

1、目的：研究不同方法體外誘導(dǎo)去分化脂肪（dedifferentiated fat，DFAT）細胞向心肌細胞方向分化的能力及表達心肌特異性標志物的差異。為DFAT細胞體外向心肌細胞定向分化尋求更為優(yōu)化的誘導(dǎo)條件，旨在為急性心肌梗死的細胞治療種子細胞的選擇奠定實驗理論基礎(chǔ)。
　　方法:自成年大鼠脂肪組織中提取成熟脂肪細胞（mature adipocytes,MA），并用天花板貼壁培養(yǎng)法使其去分化為DFAT細胞，取第3代DFAT用含有維生

2、素C的培養(yǎng)基（Vitamin C組）、含乳鼠心臟組織裂解液的培養(yǎng)基(neonatal rat heart cell lysate，NRHCL組)、含有維生素C和乳鼠心臟組織裂解液的培養(yǎng)基（Vitamin C+NRHCL組）以及普通完全培養(yǎng)基（the control group）誘導(dǎo)培養(yǎng)3周，觀察細胞形態(tài)的變化。對誘導(dǎo)3周后的DFAT細胞行cTnT的免疫熒光鑒定，并用Real-time PCR及蛋白免疫印跡(Western Blottin

3、g)法檢測各組細胞心肌特異性標志物cTnT、GATA-4及NKx2.5 mRNA和蛋白質(zhì)的表達情況。
　　結(jié)果：MA經(jīng)體外天花板貼壁培養(yǎng)后可去分化為成纖維細胞樣的DFAT細胞。經(jīng)維生素C、乳鼠心臟組織裂解液及二者聯(lián)合誘導(dǎo)法誘導(dǎo)后，可觀察到 DFAT細胞胞體伸展成長梭形，體積增大、形態(tài)變長，伸出分支狀突起，并相互連接形成細胞簇，可觀察到肌管樣結(jié)構(gòu)，細胞形態(tài)近似于心肌，但均未觀察到有自發(fā)跳動的細胞。誘導(dǎo)3周后DFAT細胞免疫熒光檢測顯

4、示三個實驗組均可觀察到心肌特異性標志物cTnT陽性的細胞。與對照組相比，試驗組DFAT細胞經(jīng)誘導(dǎo)3周后心肌特異性標志物cTnT、GATA-4及NKx2.5在mRNA和蛋白質(zhì)表達水平均升高(P<0.05)。Vitamin C+NRHCL組的表達水平均高于Vitamin C組、NRHCL組(P<0.05)。
　　結(jié)論：①天花板貼壁培養(yǎng)法可成功的使成熟脂肪細胞去分化為DFAT細胞，DFAT細胞經(jīng)乳鼠心臟組織裂解液、維生素C體外誘導(dǎo)分化后