B淋巴細(xì)胞刺激因子及增殖誘導(dǎo)配體在B細(xì)胞非霍奇金淋巴瘤中表達(dá)及臨床意義的研究.pdf

1、目的：惡性淋巴瘤是免疫系統(tǒng)的惡性腫瘤。近年來，淋巴瘤的發(fā)病率有逐年上升的趨勢。雖然靶向治療、生物免疫治療及外周血干細(xì)胞移植術(shù)等新療法的廣泛應(yīng)用，大大提高了淋巴瘤患者的無事件生存率及治愈率，但是仍有一部分患者為復(fù)發(fā)難治，預(yù)后差，需要我們不斷探索，以期找出更多治療的靶點(diǎn)。迄今為止，惡性淋巴瘤的發(fā)病機(jī)制仍不清楚。有研究表明B淋巴細(xì)胞刺激因子（B lymphocytestimulator，BLyS）能夠促進(jìn)B細(xì)胞過度增殖，該因子和增殖誘導(dǎo)配體（

2、a proliferation-induclingligand，APRIL）胞外區(qū)有高度的同源性，并且兩者有共同的受體：BCMA和TACI。APRIL在正常組織中的表達(dá)很低，在實(shí)體瘤（如胃癌、肝癌）組織中有較高的表達(dá)，而在B細(xì)胞非霍奇金淋巴瘤（B-cell non-Hodgkin lymphoma，B-NHL）中的表達(dá)情況尚不清楚。B細(xì)胞非霍奇金淋巴瘤是惡性B細(xì)胞單克隆擴(kuò)增引起的疾病，我們用酶聯(lián)免疫吸附法（enzyme-linked i

3、mmunosorbent assay，ELISA）檢測B細(xì)胞非霍奇金淋巴瘤患者血清中的BLyS及APRIL水平，分析它們與B細(xì)胞非霍奇金淋巴瘤臨床預(yù)后指標(biāo)的關(guān)系，初步探討B(tài)LyS及APRIL在B細(xì)胞非霍奇金淋巴瘤發(fā)病中的作用及意義。
　　 方法：
　　 1.標(biāo)本的收集用
　　 真空采血管分別抽取健康成年人（28例，即對(duì)照組）和B細(xì)胞非霍奇金淋巴瘤患者（28例）靜脈血4 ml，28例患者分別抽取其治療前（即初治組）

4、，治療3個(gè)療程后（即治療中期組）和治療6個(gè)療程后（即治療后期組）的血液標(biāo)本。血液離體后室溫放置30分鐘，2000 r/min離心15分鐘，取上層血清分裝于1.5ml的離心管中。標(biāo)本放入-80℃的低溫冰箱中保存?zhèn)溆谩?br>　　 2.ELISA檢測血清BLyS及APRIL水平
　　 樣本孔內(nèi)加入100μl的蒸餾水后加入50μl的血清樣本，室溫孵育三小時(shí)，倒掉孔內(nèi)液體并用洗液緩沖液清洗6次，每個(gè)孔內(nèi)加入100μl的TMB，室溫孵育

5、10分鐘后加入100μl的反應(yīng)終止液，于450 nm的地方讀取吸光值。以此方法測定對(duì)照組和B細(xì)胞非霍奇金淋巴瘤患者初治組、治療中期組及治療后期組血清中BLyS及APRIL水平變化。
　　 3.放射免疫分析方法（radioimmunoassay，RIA）測量血清β2-微球蛋白（β2-MG）含量
　　 取樣本50μl加入聚苯乙烯試管中，同時(shí)加入抗血清100μl及125I-β2-微球蛋白10μl，混勻后室溫靜止30至60分鐘，

6、再加入PR分離液500μl混勻后室溫靜止15分鐘，離心3500rpm15分鐘，吸棄上清，放入放免儀讀數(shù)計(jì)算對(duì)照組及B細(xì)胞非霍奇金淋巴瘤患者初治組、治療中期組及治療后期組的外周血β2-微球蛋白的含量。
　　 4.統(tǒng)計(jì)臨床資料
　　 乳酸脫氫酶（LDH）均參照患者及健康對(duì)照者入院檢查結(jié)果。所有患者按照Ann Arbor分期，將其分為Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期。
　　 5.測量所有數(shù)據(jù)均采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件處理，計(jì)量資料

7、以均數(shù)士標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）來表示；組間樣本比較采用兩個(gè)獨(dú)立樣本的t檢驗(yàn)及重復(fù)測量方差分析；組內(nèi)樣本各個(gè)指標(biāo)之間采用person相關(guān)性分析。檢驗(yàn)的顯著性用P值表示，P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)果：
　　 1.非霍奇金淋巴瘤患者初治組血清BLvS濃度（1.102±0.437 ng/ml；）顯著高于治療中期組（0.595±0.181 ng/ml）、治療后期組（0.355±0.082 ng/ml）和對(duì)照組（0.51

8、1±0.315ng/ml），差異有顯著性（p<0.05）；治療中期組的BLyS濃度顯著高于治療后期組的BLyS濃度，兩者之間差異有顯著性（p<0.05）；治療中期組BlyS濃度與對(duì)照組之間沒有差異（p>0.05）；治療后期組BlyS濃度顯著低于對(duì)照組，差異有顯著性（p<0.05）。非霍奇金淋巴瘤患者初治組血清APRIL濃度（1.417±0.385 ng/ml）顯著高于治療后期組（1.061±0.116 ng/ml）和對(duì)照組（1.008±

9、0.263 ng/ml），差異有顯著性（p<0.05），但與治療中期組APRIL濃度（1.401±0.185ng/ml）沒有差異（p>0.05）；治療中期組的APRIL濃度顯著高于治療后期組和對(duì)照組APRIL濃度，兩者之間差異有顯著性（p<0.05）；治療后期組APRIL濃度與對(duì)照組之間沒有差異（p>0.05）。
　　 2.非霍奇金淋巴瘤患者初治組血清β2-MG水平（5.114±0.788μg/ml）明顯高于治療中期組（1.98

10、4±0.398μg/ml）、治療后期組（2.012±0.508μg/ml）及對(duì)照組（1.908±0.218μg/ml），差異有顯著性（p<0.05）；治療中期組血清β2-MG水平與治療后期組兩者之間無顯著性差異（p>0.05），治療中期組血清β2-MG水平與對(duì)照組之間無顯著性差異（p>0.05）；治療后期組血清β2-MG水平與對(duì)照組之間無顯著性差異（p>0.05）。
　　 3.通過總結(jié)臨床病例得到LDH的數(shù)據(jù)經(jīng)分析后得出以下結(jié)果

11、：初治組患者血清LDH水平（360.071±89.215U/L）明顯高于治療中期組（189.432±34.251 U/L）、治療后期組（149.961±15.179 U/L）及對(duì)照組（150.143±32.326 U/L），差異有顯著性（p<0.05）；治療中期組血清LDH水平明顯高于治療后期組及對(duì)照組，差異均有顯著性（p<0.05）；治療后期組血清LDH水平與對(duì)照組之間無顯著性差異（p>0.05）。
　　 4.統(tǒng)計(jì)這28例病人

12、的臨床資料，按照Ann Arbor分期方法將淋巴瘤患者分為Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期。Ⅲ/Ⅳ期淋巴瘤患者為一組，Ⅰ/Ⅱ期淋巴瘤患者分為另一組，比較兩組之間的BlyS及APRIL在治療前、治療三個(gè)療程后及治療六個(gè)療程后的水平變化。結(jié)果如下：①初治組Ⅲ/Ⅳ期病人的BlyS水平（1.537±0.287）顯著高于Ⅰ/Ⅱ期（0.776±0.138），兩者之間差異有顯著性（p<0.05）；治療中期組Ⅲ/Ⅳ期病人的BIyS水平（0.753±0.134）顯著高于

13、Ⅰ/Ⅱ期（0.461±0.073），兩者之間差異有顯著性（p<0.05）；治療后期組Ⅲ/Ⅳ期病人的BlyS水平（0.431±0.061）顯著高于Ⅰ/Ⅱ期（0.298±O.037），兩者之間差異有顯著性（p<0.05）；②初治組Ⅲ/Ⅳ期病人的APRIL水平（1.764±0.311）顯著高于Ⅰ/Ⅱ期（1.157±0.164），兩者之間差異有顯著性（p<0.05）；治療中期組Ⅲ/Ⅳ期病人的APRIL水平（1.580±0.111）顯著高于Ⅰ/Ⅱ

14、期（1.266±0.084），兩者之間差異有顯著性（p<0.05）；治療后期組Ⅲ/Ⅳ期病人的APRIL水平（1.178±0.037）顯著高于Ⅰ/Ⅱ期（0.974±0.066），兩者之間差異有顯著性（p<0.05）。
　　 5.患者外周血BLyS濃度和APRIL濃度之間呈正相關(guān)（p<0.05）；外周血BLyS的濃度與β2-MG及LDH均呈正相關(guān)（p<0.05）；APRIL的濃度亦與外周血中β2-MG及LDH均呈正相關(guān)（p<0.05

15、）。
　　 結(jié)論：
　　 1、血清BLyS和APRIL水平在B細(xì)胞非霍奇金淋巴瘤患者治療前高表達(dá)，隨著病情的好轉(zhuǎn)而逐漸下降，提示BLyS及APRIL與B細(xì)胞非霍奇金淋巴瘤發(fā)病有關(guān)。
　　 2、B細(xì)胞非霍奇金淋巴瘤患者臨床分期越高，血清BLyS和APRIL表達(dá)越高，提示二者可作為判斷B細(xì)胞非霍奇金淋巴瘤疾病嚴(yán)重程度的相關(guān)指標(biāo)。
　　 3、血清BLyS和APRIL水平與B細(xì)胞非霍奇金淋巴瘤中已明確的臨床預(yù)后指