葛根素微乳的制備及生物利用度的研究.pdf

1、葛根素(Puerarin)為豆科葛屬植物葛根異黃酮的主要有效成分之一,臨床療效確切。因其在水中溶解度較低,口服生物利用度僅為3.779％；臨床上主要將其溶解于1,2-丙二醇中制備注射劑,然而關(guān)于葛根素注射液臨床應(yīng)用不良反應(yīng)的報(bào)道較多,因此研究高生物利用度口服葛根素微乳制劑具有重要意義。本課題以微乳為藥物載體制備高載藥量葛根素口服給藥系統(tǒng),通過前期組份篩選、相圖制備確定微乳處方,以市售片劑為對(duì)照考察微乳中藥物在不同介質(zhì)中的溶出特征,采用C

2、aco-2細(xì)胞模型考察微乳體系中藥物轉(zhuǎn)運(yùn)特性,動(dòng)物體內(nèi)考察葛根素微乳藥物動(dòng)力學(xué)特征并對(duì)制劑體內(nèi)外相關(guān)性進(jìn)行初步研究。 處方前研究中,建立了葛根素在甲醇-水,人工胃液、人工腸液和30％乙醇環(huán)境中的HPLC-UV含量測(cè)定方法并對(duì)方法進(jìn)行系統(tǒng)評(píng)價(jià),結(jié)果表明分析方法準(zhǔn)確、靈敏、快速,符合測(cè)試要求。測(cè)定葛根素在不同表面活性劑、助表面活性劑和油相、水相中的溶解度,葛根素在油相中基本不溶；在不同pH水相中微溶,隨pH上升溶解度增大；在Brij

3、-96v中溶解度較大。對(duì)葛根素12h內(nèi)在人工胃液和人工腸液中的穩(wěn)定性進(jìn)行考察,在考察時(shí)間范圍內(nèi)(12h),藥物穩(wěn)定性良好。 通過溶解度實(shí)驗(yàn)、處方配伍實(shí)驗(yàn)和偽三元相圖的繪制,以乳化時(shí)間、色澤和粒徑的大小為指標(biāo),篩選油相、表面活性劑、助表面活性劑的最佳搭配和處方配比。微乳的最佳處方確定為IPM(10％),Brij-96V(32.5％),Ethanol(32.5％),Water(25％)。葛根素在微乳中的溶解度最高可達(dá)77mg/ml,

4、PUE-ME的粒徑為(16.46±2.95)nm,自微乳化時(shí)間<1 min。以市售片劑為對(duì)照,進(jìn)行了葛根素的體外藥物釋放試驗(yàn)。在pH1.2和pH6.8兩種介質(zhì)中,葛根素微乳的體外釋藥速度和程度明顯大于市售片劑,12h累積釋藥量達(dá)90％。同一處方在模擬腸液中的釋藥速度比在模擬胃液中稍快。在葛根素微乳體外釋藥機(jī)制的考察實(shí)驗(yàn)中,葛根素微乳在兩種介質(zhì)中的釋藥機(jī)制分別符合一級(jí)動(dòng)力學(xué)和Ritger-peppas動(dòng)力學(xué)方程。 Caco-2細(xì)胞

5、模型的建立是通過細(xì)胞接種于Millicell插入式培養(yǎng)皿中,培養(yǎng)21天后,測(cè)定堿性磷酸酶活性、跨膜電阻、熒光素鈉透過量以檢驗(yàn)細(xì)胞的極化現(xiàn)象和致密程度驗(yàn)證細(xì)胞模型特性。以Caco-2細(xì)胞模型進(jìn)行葛根素微乳制劑中藥物的細(xì)胞攝取、跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)的研究,結(jié)果表明微乳和微乳稀釋液中葛根素的吸收、分泌和攝取均較對(duì)照組顯著增加；P糖蛋白抑制劑-環(huán)孢菌素可抑制對(duì)照液和微乳液中葛根素在Caco-2細(xì)胞的分泌而對(duì)轉(zhuǎn)運(yùn)影響較小。 大鼠血漿中葛根素的測(cè)定采用

6、UltimateXB-C18柱(250*4.6,5μm),柱溫：40℃,流動(dòng)相：甲醇-水為22:78,檢測(cè)波長(zhǎng)：250nm,采用蛋白沉淀法處理血漿,在40～2000ng/ml的范圍內(nèi)線性關(guān)系良好(r2=0.9986)。定量下限為40ng/ml,回收率和精密度符合生物樣品的測(cè)定要求。方法可用于大鼠血漿中葛根素的含量測(cè)定和藥動(dòng)學(xué)研究。 SD大鼠分別以30mg/kg的劑量灌胃給予葛根素微乳,以葛根素原料藥配制混懸液為對(duì)照,3P87軟件計(jì)算藥動(dòng)