鋅-金屬硫蛋白對深Ⅱ度燙傷大鼠創(chuàng)面愈合影響的實驗研究.pdf

1、背景： 臨床上燒(燙)傷以中小面積、II度為絕大多數(shù)。II度燒(燙)傷創(chuàng)面的轉(zhuǎn)歸，與早期創(chuàng)面局部微循環(huán)和后期創(chuàng)面微血管生成密切相關(guān)。早期創(chuàng)面的深度處于動態(tài)變化過程之中，因為局部缺血缺氧和過度炎癥反應(yīng)，一般創(chuàng)面都會逐漸加深。燒(燙)傷后引起氧化應(yīng)激，過量的氧自由基致使創(chuàng)面修復(fù)細胞的遷移、增殖能力下降，細胞外基質(zhì)合成障礙，并通過破壞角化的上皮細胞和管腔的滲透性以及膠原的代謝阻礙創(chuàng)面愈合進程。因此，有針對性的尋求通過對抗深I(lǐng)I度燒(燙

2、)傷創(chuàng)面氧化應(yīng)激反應(yīng)、改善創(chuàng)面局部微循環(huán)、減輕過度炎癥反應(yīng)，以促進燒(燙)傷創(chuàng)面愈合的藥物，將為燒(燙)傷創(chuàng)面提供新的治療手段和護理思路。鋅，金屬硫蛋白(Zn-metallothionein，Zn-MT)系一種低分子量含多巰基與二價金屬、鰲合7個鋅離子的非酶蛋白，一系列研究表明，Zn-MT具有較強的清除氧自由基，抗脂質(zhì)過氧化的作用，而且在創(chuàng)面愈合過程中發(fā)現(xiàn)其可與一些細胞因子相互作用共同調(diào)節(jié)傷口愈合過程。但目前國內(nèi)外的研究僅涉及Zn-MT

3、對實驗動物燙傷創(chuàng)面下組織耗氧量、琥珀酸脫氫酶活性的影響，對Zn-MT是否可以抑制燒(燙)傷創(chuàng)面氧化應(yīng)激反應(yīng)、改善創(chuàng)面微循環(huán)，防止血栓形成，并阻止早期燒(燙)傷創(chuàng)面向深部發(fā)展，促進并加快創(chuàng)面愈合尚無研究。 目的： 本研究通過建立深I(lǐng)I度燙傷大鼠模型，觀察Zn-MT對深Ⅱ度燙傷創(chuàng)面氧化應(yīng)激反應(yīng)的抑制作用，并觀察其對創(chuàng)面微循環(huán)的影響，探討Zn-MT在深I(lǐng)I度燒(燙)傷創(chuàng)面愈合中的作用，從抑制氧化應(yīng)激反應(yīng)的角度探討其促進創(chuàng)面愈合

4、的可能作用機制，為燒(燙)傷創(chuàng)面治療提供新的策略和護理思路。 材料和方法： 1.將健康雄性Wistar大鼠78只隨機分為實驗組(Zn-MT組)、對照組(生理鹽水組)和正常對照組，實驗組和對照組各36只，正常對照組6只。實驗組和對照組均建立深I(lǐng)I度燙傷大鼠模型，傷后即刻給藥，二組分別外敷單層紗布浸潤的濃度為1×10-5mol/L的Zn-MT以及等滲鹽水，第一天每4h換藥1次，第2天和第3天每8h換藥1次，此后每日換藥1次，

5、直至創(chuàng)面愈合。 2.分別在傷后12h、24h、48h及7d、14d、21d，6個時相點觀察創(chuàng)面愈合面積、創(chuàng)面愈合率，蘇木精.伊紅染色觀察創(chuàng)面愈合情況，免疫組織化學(xué)染色計算創(chuàng)面微血管密度(nucrovessel density， MVD)以及血管內(nèi)皮生長因子(vascular endothelial growthfactor，VEGF)含量，黃嘌呤氧化還原酶法測定創(chuàng)面組織超氧化物歧化酶(superoxidediamutase，SO

6、D)活性，硫代巴比妥酸法測定創(chuàng)面組織丙二醛(malonaldehyde，MDA)含量，氯胺T法測定創(chuàng)面組織羥脯氨酸(hydroxyproline，HYP)含量及免疫染色法測定創(chuàng)面組織I型和III膠原含量。 結(jié)果： 1.各組大鼠創(chuàng)面愈合面積百分比：實驗組和對照組兩組的創(chuàng)面愈合率隨時間推移均表現(xiàn)出上升趨勢，在傷后7d，14d，18d，21d實驗組的創(chuàng)面愈合率均顯著高于對照組(P<0.05)。 2.在傷后7d、14d、

7、21d三個時相點，兩組的創(chuàng)面MVD隨時間推移均表現(xiàn)出上升趨勢，相對三個時相點而言均有非常顯著的升高(P<0.Ol)，而且實驗組顯著高于對照組(P<0.01)。 3.在傷后12h，實驗組和對照組兩組的創(chuàng)面VEGF含量與正常對照組相比未顯示出顯著差異(P>0.05)。在傷后24h、48h、7d、14d兩組含量均逐漸增加，除對照組在24h時與正常對照組相比沒有顯著差異外(P>0.05)，其余均顯示顯著升高(P<0.01)，實驗組在上述

8、四個時相點均顯著高于對照組(P<0.01)。在傷后21d，實驗組與對照組均有所下降，但與正常對照組相比仍存在顯著差異(P<0.01)，且兩組間存在顯著差異(P<0.05)。 4.在傷后12h、24h、48h、7d、14d，實驗組和對照組兩組的創(chuàng)面組織SOD活性均較正常對照組顯示出顯著降低(P<0.01)，且兩組之間也存在顯著差異(P<0.05)。在傷后21d，對照組活性與正常對照組相比仍存在顯著差異(P<0.01)，而實驗組與其

9、相比已無顯著差異(P>0.05)。從均值來看，兩組隨著時間的推移均呈現(xiàn)上升趨勢，對照組上升趨勢較緩，實驗組上升較快。 5.在傷后12h，實驗組和對照組兩組的創(chuàng)面組織MDA含量與正常對照組相比沒有統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。在傷后24h、48h，兩組與正常對照組相比均明顯升高(P<0.01)，但實驗組升高程度小于對照組(P<0.05)。在傷后7d，兩組均降低，但實驗組降低程度明顯大于對照組(P<0.05)，且對照組與jF常對照組相

10、比有顯著差異(P<0.05)。在傷后14d、21d，兩組均下降，與正常對照組相比沒有顯著性差異(P>0.05)。 6.在傷后48h、7d，實驗組和對照組的創(chuàng)面組織HYP含量均顯著升高，與正常對照組相比有顯著性差異(P<0.01)，且實驗組均顯著高于對照組(P<0.01)。在傷后14d，實驗組仍顯著高于對照組(P<0.01)，但與正常對照組相比無顯著性差異(P>0.05)。在傷后21d，實驗組顯著高于正常對照組(P<0.05)，而

11、對照組與正常對照組相比無顯著性差異(P>0.05)。 7.實驗組I、III型膠原在傷后不同時間其免疫組化染色灰度百分比均高于對照組(P<0.01)，其中I型膠原變化特點為隨傷后時間表達量逐漸升高，而III型膠原在傷后早期即有明顯的合成，隨著傷口逐漸愈合，其表達量逐漸下降。 結(jié)論： 1.鋅-金屬硫蛋白能明顯縮短創(chuàng)面上皮化的時間，通過改善毛細血管血運，有效地改善燒(燙)傷創(chuàng)面微循環(huán)，并促進創(chuàng)面微血管的形成，從而加快創(chuàng)

12、面愈合。 2.鋅-金屬硫蛋白可增加大鼠深I(lǐng)I度燙傷創(chuàng)面組織血管內(nèi)皮因子的合成和釋放，從而通過調(diào)節(jié)血管內(nèi)皮細胞增殖、遷移、增加微血管的通透性促進創(chuàng)面愈合。 3.鋅-金屬硫蛋白可通過減少創(chuàng)面對超氧化物歧化酶的消耗，減少丙二醛的產(chǎn)生來抑制脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，保護膜脂質(zhì)與膜蛋白，其能夠清除脂質(zhì)過氧化物代謝物和自由基是抑制氧化應(yīng)激反應(yīng)的機制之一。 4.鋅-金屬硫蛋白可以釋放鋅離子予創(chuàng)面，通過金屬硫蛋白對鋅的代謝調(diào)控達到創(chuàng)面補鋅