人白細(xì)胞介素-24對(duì)胃癌細(xì)胞生長(zhǎng)的影響及其抗腫瘤機(jī)制的研究.pdf

1、目的：純化人白細(xì)胞介素24的原核重組表達(dá)質(zhì)粒pET-21a(+)-IL-24在大腸桿菌BL(DE3)中的表達(dá)產(chǎn)物rhIL-24，觀察重組表達(dá)蛋白rhIL-24對(duì)胃癌細(xì)胞株SGC-7901體外生長(zhǎng)的影響，并初步探討其抗腫瘤作用可能的機(jī)制。 方法：利用IPTG誘導(dǎo)原核表達(dá)載體pET-21a)(+)IL-24在大腸桿菌中表達(dá)IL-24，經(jīng)純化、復(fù)性后獲取重組蛋白rhIL-24。將rhIL-24作用于人胃癌細(xì)胞株SGC-790l，四氮唑

2、藍(lán)(MTT)比色還原法檢測(cè)rhIL-24對(duì)胃癌細(xì)胞體外生長(zhǎng)的影響，流式細(xì)胞儀檢測(cè)凋亡峰，免疫熒光染色觀察細(xì)胞凋亡形態(tài)。逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶聯(lián)反應(yīng)(RT-PCR)、免疫印跡法(WesternBlotting)檢測(cè)rhIL-24對(duì)胃癌細(xì)胞株SGC-7901中促凋亡因子bax表達(dá)的影響，雞胚絨毛尿囊膜實(shí)驗(yàn)觀察rhIL-24對(duì)血管生成的影響。 結(jié)果：獲得較高含量的重組蛋白rhIL-24。MTT法發(fā)現(xiàn)rhIL-24對(duì)體外培養(yǎng)的胃癌細(xì)胞株SGC-

3、7901有明顯的生長(zhǎng)抑制作用，且呈時(shí)間、劑量依賴(lài)性，與陰性對(duì)照組相比差異有顯著性(P<0．05)。rhIL-24蛋白30μg／ml作用于SGC-7901細(xì)胞24h后，流式細(xì)胞儀(FCM)檢測(cè)結(jié)果顯示有明顯的凋亡峰出現(xiàn)，免疫熒光染色后顯示染色質(zhì)固縮，細(xì)胞核呈致密濃染或呈碎塊狀致密濃染，而陰性對(duì)照組沒(méi)有凋亡峰出現(xiàn)，細(xì)胞的細(xì)胞核形態(tài)正常。RT-PCR、WesternBlotting檢測(cè)發(fā)現(xiàn)rhIL-24處理組(30μg／ml)胃癌細(xì)胞中促凋亡

4、因子baxmRNA、蛋白表達(dá)增高，雞胚絨毛尿囊膜實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)rhIL-24處理組(30μg／m1)雞胚絨毛尿囊膜二、三級(jí)血管數(shù)目明顯減少，三級(jí)血管的數(shù)目與生理鹽水組比較，差異有顯著性(P<0．001)。從形態(tài)上來(lái)看，生理鹽水組(NS)血管分支狀結(jié)構(gòu)完整，各級(jí)血管清晰可見(jiàn)，rhIL-24組可見(jiàn)血管呈迂曲狀向外周生長(zhǎng)，失去正常的血管樹(shù)枝狀分布，平陽(yáng)霉素處理組的二、三級(jí)血管數(shù)明顯減少，可見(jiàn)雞胚絨毛尿囊膜水腫。 結(jié)論：本實(shí)驗(yàn)成功純化IL-2