甘草次酸對(duì)豚鼠單個(gè)心室肌細(xì)胞動(dòng)作電位的影響.pdf

1、　　背 景：心律失常是指心臟沖動(dòng)的頻率、節(jié)律、起源部位、傳導(dǎo)速度或激動(dòng)次序的異常,其為臨床心血管系統(tǒng)常見病、多發(fā)病,病機(jī)錯(cuò)綜復(fù)雜,種類繁多,甚至造成猝死,嚴(yán)重危害患者的身體健康。臨床醫(yī)師在臨床工作中對(duì)心律失常的有效處理是一項(xiàng)重要任務(wù)。心律失常治療目前仍以藥物治療為主,但是這些藥物在臨床治療心律失常的同時(shí)也有不同程度的致心律失常的作用。研究能夠多靶點(diǎn)干預(yù)、恢復(fù)離子通道正常生理功能的藥物是今后藥物研發(fā)的方向。中醫(yī)藥以其悠久的歷史,確切的療效

2、,在臨床應(yīng)用治療心律失常方面發(fā)揮了不錯(cuò)的療效。甘草在臨床上被廣泛用于抗心律失常的中藥復(fù)方組成中,甘草次酸(Glycyrrhetinic acid 1 Gta)是甘草的主要有效物質(zhì),實(shí)驗(yàn)研究證實(shí) Gta具有對(duì)抗實(shí)驗(yàn)性心律失常的作用,但是其抗心律失常機(jī)制尚不清楚。本實(shí)驗(yàn)正是基于膜片鉗技術(shù),以期從離子通道水平探明Gta抗心律失常的藥理機(jī)制。
　　目 的： 通過應(yīng)用膜片鉗技術(shù),進(jìn)行豚鼠心肌細(xì)胞外灌流Gta單體藥液,觀察Gta單體藥液對(duì)豚

3、鼠單個(gè)心室肌細(xì)胞用藥前后以及洗脫后全細(xì)胞動(dòng)作電位(AP)的變化,探討Gta是否通過影響心肌細(xì)胞的離子通道電流發(fā)揮抗心律失常作用,闡述Gta抗心律失常作用的藥理機(jī)制。
　　方 法： 實(shí)驗(yàn)分為Gta 4.7×10-3g/L(大劑量組)、4.7×10-4g/L(中劑量組)和4.7×10-5g/L(小劑量組)三個(gè)劑量組,每組觀察五個(gè)離體豚鼠心室肌細(xì)胞用藥前后以及洗脫后的動(dòng)作電位各項(xiàng)指標(biāo)的變化。利用自制Langendorff體外心臟灌流系

4、統(tǒng)急性分離豚鼠心室肌細(xì)胞,分離所得細(xì)胞液用塑料離心管保存,放置于4℃冰箱中穩(wěn)定一小時(shí)以后待用。膜片鉗實(shí)驗(yàn)中選擇桿狀,外形完整,透光度好,橫紋清晰無顆粒的細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)研究。通過全細(xì)胞膜片鉗記錄技術(shù)進(jìn)行全細(xì)胞記錄,細(xì)胞封接、破膜完成后,給予(1-2)nA刺激誘發(fā)動(dòng)作電位。以相同方法分別誘發(fā)出細(xì)胞灌藥前后以及洗脫后的動(dòng)作電位后記錄Gta單體溶液對(duì)單個(gè)豚鼠心室肌細(xì)胞用藥前后及洗脫后的動(dòng)作電位,用美國(guó)Axon公司的 Clampex10.1軟件分析

5、實(shí)驗(yàn)所得的動(dòng)作電位圖形,比較用藥前后以及洗脫后動(dòng)作電位幅值(APA)、復(fù)極50%的全細(xì)胞動(dòng)作電位時(shí)程(APD50)、復(fù)極90%的全細(xì)胞動(dòng)作電位時(shí)程(APD90)和復(fù)極50-90%的全細(xì)胞動(dòng)作電位時(shí)程(APD50-90)的變化。
　　結(jié) 果：4.7×10-3g/L Gta單體溶液使APA從用藥前(122.1±4.7)mV減小至用藥后(107.9±6.6)mV(n=5,P<0.01), APD50從用藥前(508.5±84.8)ms

6、延長(zhǎng)至用藥后(759.7±63.5)ms(n=5,P<0.05), APD90從用藥前(533.4±82.7)ms延長(zhǎng)至用藥后(799.4 ± 56.3)ms(n=5,P<0.05), APD50-90從用藥前(24.9 ± 9.4)ms延長(zhǎng)至藥后(38.3±12.1)ms(n=5,P<0.05)(表1)。4.7×10-4g/L Gta 單體溶液與各項(xiàng)指標(biāo)的變化趨勢(shì)與4.7×10-3g/L Gta 單體溶液基本 一致(表2)。4.7×1

7、0-5g/L Gta 單體溶液對(duì)單個(gè)豚鼠心室肌細(xì)胞全細(xì)胞動(dòng)作電位的各項(xiàng)指標(biāo)的變化沒有明顯的影響作用。
　　結(jié) 論： ① Gta 單體藥液使豚鼠心室肌細(xì)胞APA減小,提示藥物可能會(huì)抑制0相INa+,通過抑制快鈉通道使傳導(dǎo)速度減慢,阻斷折返激動(dòng)發(fā)揮抗心律失常作用。
　?、?Gta 單體藥液使豚鼠心室肌細(xì)胞APD90延長(zhǎng),提示藥物可能對(duì)豚鼠心室肌細(xì)胞的內(nèi)向鈣離子電流(ICa-L)有促進(jìn)效應(yīng)和外向鉀離子電流(IK+、IK1、IK

8、r)有抑制效應(yīng),延長(zhǎng)動(dòng)作電位的不應(yīng)期,減慢心率,發(fā)揮對(duì)抗快速性心律失常的作用。
　?、?Gta 單體藥液使豚鼠心室肌細(xì)胞APD50延長(zhǎng),提示藥物可能對(duì)動(dòng)作電位 2相平臺(tái)期ICa-L起促進(jìn)效應(yīng)或者對(duì)IK+有一定的抑制效應(yīng),從而使心肌細(xì)胞平臺(tái)期延長(zhǎng),減慢復(fù)極速率,延長(zhǎng)有效不應(yīng)期發(fā)揮抗心律失常作用。
　　④ Gta 單體藥液使豚鼠心室肌細(xì)胞APD50-90延長(zhǎng),提示藥物可能抑制3相外向的鉀離子電流IK1、IKr,延遲復(fù)極化過程