天葵萃取物對TMV及其寄主生化影響研究.pdf

1、煙草花葉病毒病是農(nóng)業(yè)生產(chǎn)上的重要病害之一，由于植物病毒的絕對寄生性，使其難于防治，目前國內(nèi)外缺少高效的抗病毒藥劑。隨著人們生活水平的提高，環(huán)境問題備受關注。植物源抗病毒劑低毒、低殘留、高效、與環(huán)境相和諧，是今后抗病毒劑發(fā)展方向。本文從中草藥——天葵(Semiaquilegiaadoxoides)塊根中提取分離抗煙草花葉病毒(Tobaccomosaicvirus,TMV)的活性物質，為抗病毒劑活性成分的篩選提供重要的理論依據(jù)與實踐指導。

2、 在師姐畢亞玲對天葵提取物對TMV活性研究基礎上，改進了提取方法；采用半葉枯斑法以及成功摸索的酶聯(lián)免疫吸附法進行了生物活性測定，篩選出天葵萃取物中抗TMV的活性成分；通過測定寄主植物體內(nèi)幾種酶活性的變化來研究天葵萃取物對TMV的作用機理。取得如下結果： 1.本研究明確了對天葵化學成分的初提取(萃取)方法，先用95％無水乙醇冷凝回流提取天葵根粉，提取液依次萃取，得到天葵石油醚萃取物、氯仿萃取物、乙酸乙酯萃取物、正丁醇萃取物和

3、水部分，其萃取率分別為38.0％、7.5％、6.5％、2.4％、27.5％。 2用煙葉半葉枯斑法進行對TMV活性測定，發(fā)現(xiàn)濃度為10.0mg/ml天葵萃取物對侵染心葉煙的13.0μg/mlTMV具有一定的抑制效果。試驗結果表明：天葵萃取物有較強的治療作用，其中乙酸乙酯萃取物治療效果最好，離體效果、盆栽效果分別達71.41％、72.36％，均與對照藥液病毒A差異極顯著；石油醚萃取物與氯仿萃取物的盆栽抑制效果分別為50.26％、47

4、.01％，均與對照藥液病毒A差異顯著；但氯仿萃取物離體治療效果為52.69％，與對照藥劑差異不顯著。鈍化效果表明：乙酸乙酯萃取物的鈍化效果最好，達到69.67％，與病毒A差異極顯著；氯仿萃取物、石油醚萃取物鈍化效果分別為53.39％、49.86％，與對照藥液效果差異不顯著。保護作用中，離體效果較好的氯仿萃取物、乙酸乙酯萃取物，抑制效果分別是41.01％、35.4％，與對照藥劑差異極顯著；甕栽實驗中，氯仿萃取物、乙酸乙酯萃取物、石油醚萃取

5、物抑制效果分別為42.04％、41.83％、37.14％，均與對照藥劑病毒A差異極顯著。 3.用酶聯(lián)免疫吸附法進行天葵萃取物對TMV生物活性測定結果進一步表明：處理后寄主植物病毒侵染量達到最高值的時間推遲；處理后對寄主植物癥狀有較好的減輕效果。本試驗在保護作用中，石油醚萃取物、氯仿萃取物、乙酸乙酯萃取物、正丁醇萃取物、病毒A處理寄主植物后病毒OD(于492nm光密度)值在第5天達到最大值，而陽性對照在3天出現(xiàn)最大值，說明處理能延

6、遲TMV侵染時間。氯仿萃取物保護效果較好，且優(yōu)于其他處理效果，其最大OD值僅為0.073，其次為石油醚萃取物、病毒A、乙酸乙酯萃取物。在治療作用中，寄主植物的病毒侵染量在前7天呈上升趨勢，在第7天達到最大，然后減少；其中乙酸乙酯萃取物的作用效果最好(病毒OD值為0.128，最小)，其次病毒A、石油醚萃取物、氯仿萃取物。 同一時間對寄主植物進行處理，處理后不同間隔期接種病毒，接種后第3天采樣測定。結果表明：處理后隨著接種間隔期的延

7、長，病毒侵染量呈上升趨勢，天葵萃取物對TMV的抑制能力與病毒OD值呈負相關。不同處理后第1天接種病毒，其OD值大小為氯仿萃取物(0.053)、石油醚萃取物(0.094)、乙酸乙酯萃取物(0.150)、病毒A(0.146)。處理后接種TMV，間隔期越長天葵萃取物的抑制能力越弱。施用乙酸乙酯萃取物對TMV抑制作用時間最長，達18天左右；石油醚萃取物、氯仿萃取物、正丁醇萃取物作用時間約13天；病毒A、水部分僅有8天。 4.研究了天葵萃

8、取物處理寄主后體內(nèi)生理生化變化。結果表明：經(jīng)保護作用煙葉中CAT酶活性先下降再上升，第5天達到高峰，之后迅速下降，且均低于空白對照，空白對照在第3天達到高峰。POD和SOD活性變化趨勢呈先上升后下降，處理后的曲線均低于空白對照。處理后不僅推遲2天達到最大病情，而且減輕了病癥；石油醚萃取物保護作用最好，其次是氯仿萃取物、病毒A、乙酸乙酯萃取物。經(jīng)治療作用煙葉中CAT活性變化趨勢先下降后上升，POD和SOD酶活性變化趨勢先升高后下降再升高。