四大類原癌基因在大鼠原始卵泡啟動(dòng)生長(zhǎng)中作用的初探.pdf

1、目的:
　　 采用基因芯片技術(shù),初步探究與細(xì)胞增殖、凋亡和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)有密切關(guān)系的四大類主要原癌基因在原始卵泡啟動(dòng)生長(zhǎng)中的作用。
　　 方法:
　　 (1)取出生2d的SD大鼠卵巢,分別在50ng/ml表皮生長(zhǎng)因子(EGF)、200ng/ml生長(zhǎng)分化因子-9(GDF-9)、10-5mol/L雌二醇(E2)、10-5mol/L孕酮(P4)的Waymouth培養(yǎng)體系中培養(yǎng),以單純Waymouth培養(yǎng)體系培養(yǎng)的大鼠卵巢為空

2、白對(duì)照,培養(yǎng)8d后,石蠟包埋切片,HE染色,觀察各級(jí)卵泡形態(tài),并統(tǒng)計(jì)分析各級(jí)正常卵泡數(shù),初步觀察不同發(fā)育階段和不同因子作用下的卵泡發(fā)育情況。
　　 (2)分別提取各組卵巢組織的總RNA,應(yīng)用Illumina大鼠RatRef-12全基因組表達(dá)譜芯片研究各組卵巢組織基因表達(dá)的差異,探討四大類原癌基因在原始卵泡正常啟動(dòng)生長(zhǎng)過(guò)程中的變化,同時(shí)分析EGF、GDF-9、E2、P4在調(diào)控原始卵泡啟動(dòng)生長(zhǎng)中的作用與四大類原癌基因的關(guān)系。

3、　　 結(jié)果:
　　 (1)經(jīng)組織形態(tài)學(xué)的比較、各級(jí)正常卵泡數(shù)量的計(jì)算,觀察到與單純Waymouth培養(yǎng)體系培養(yǎng)的大鼠卵巢相比較,在Waymouth培養(yǎng)體系中分別加入50ng/ml EGF和200ng/ml GDF-9,均能進(jìn)一步促進(jìn)原始卵泡的啟動(dòng)生長(zhǎng),而在Waymouth培養(yǎng)體系中分別加入10-5mol/L E2和10-5mol/L P4,均會(huì)抑制原始卵泡的啟動(dòng)生長(zhǎng)。
　　 (2)芯片結(jié)果顯示:與新生組比較,8d空白對(duì)

4、照組有3540個(gè)基因表達(dá)發(fā)生變化,其中上調(diào)的有1638個(gè)(Diffscore值>+20),包含了7個(gè)原癌基因A2m,Egfr,Fgf7,Fgr,Myc,Neul,Thrb,下調(diào)的有1902個(gè)(Diffscore值<-20),包含了5個(gè)原癌基因Braf,Kit,Mycll,Ntrk3,Reln。與空白對(duì)照組比較,EGF組有88個(gè)基因表達(dá)上調(diào),其中包含1個(gè)原癌基因A2m,79個(gè)基因表達(dá)下調(diào),其中包含1個(gè)原癌基因Mycn；GDF-9組和P4組

5、,雖然分別有178個(gè)和121個(gè)基因發(fā)生了表達(dá)變化,但是均未發(fā)現(xiàn)表達(dá)差異的原癌基因；E2組有108個(gè)基因上調(diào),127個(gè)基因下調(diào),其中包含1個(gè)表達(dá)下調(diào)的原癌基因Mycn。
　　 結(jié)論:
　　 (1)在原始卵泡正常的啟動(dòng)生長(zhǎng)過(guò)程中,一部分原癌基因參與了該過(guò)程的調(diào)控,如:A2m,Egfr,Fgf7,Myc,Reln,Kit。
　　 (2)EGF對(duì)于原始卵泡啟動(dòng)生長(zhǎng)的促進(jìn)作用可能與原癌基因A2m的表達(dá)上調(diào)有關(guān)。GDF-9、