結(jié)合珠蛋白基因型及血漿水平與冠心病相關(guān)性研究.pdf

1、研究背景
　　 由于冠狀動(dòng)脈粥樣硬化所致的心臟病常稱(chēng)為冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性心臟病（簡(jiǎn)稱(chēng)冠心病，Coronary Heart Disease CHD）。其病理過(guò)程是在內(nèi)皮損傷的基礎(chǔ)上出現(xiàn)冠狀動(dòng)脈粥樣硬化，進(jìn)而產(chǎn)生粥樣斑塊，最終引起管腔狹窄甚至閉塞。內(nèi)皮功能損傷、巨噬細(xì)胞浸潤(rùn)、泡沫細(xì)胞形成、平滑肌細(xì)胞增殖、血小板激活聚集以及血栓形成是其主要機(jī)制。氧化應(yīng)激與炎癥反應(yīng)在這一過(guò)程中起到重要作用，其中炎性反應(yīng)貫穿整個(gè)過(guò)程，越來(lái)越多的研究顯示冠

2、心病具有慢性炎癥的特征。
　　 急性時(shí)相反應(yīng)蛋白（Acute-phase-protein APP）包括C-反應(yīng)蛋白、轉(zhuǎn)鐵蛋白、血漿銅藍(lán)蛋白、結(jié)合珠蛋白（Haptoglobin）等，可用于鑒別急性、亞急性與慢性病理狀態(tài)，在一定程度上與病理?yè)p傷的性質(zhì)和范圍也有相關(guān)。C反應(yīng)蛋白（C-reactive protein，CRP）目前在臨床上已經(jīng)應(yīng)用的十分普遍，F(xiàn)ramingham的風(fēng)險(xiǎn)積分表根據(jù)高敏C反應(yīng)蛋白水平將心血管患者分為低、中、高

3、危組。但是否其它ARP也能預(yù)測(cè)心血管疾病的發(fā)生危險(xiǎn)以及心血管病的病變程度尚不清楚。
　　 結(jié)合珠蛋白（Haptoglobin，Hp）屬于急性時(shí)相反應(yīng)蛋白之一。它的主要功能是通過(guò)與游離血紅蛋白（heamoglobin，Hb）結(jié)合形成Hp-Hb復(fù)合物，該復(fù)合物能通過(guò)胞吞作用被巨噬細(xì)胞或單核細(xì)胞表面所表達(dá)的CD163攝取，最終轉(zhuǎn)化為可重復(fù)利用的鐵離子和膽紅素。Hp具有一定的抗氧化功能，其血清含量在腫瘤、炎癥、創(chuàng)傷、感染、心肌梗塞等病理

4、情況時(shí)常顯著升高。Hp尚有抑制前列腺素合成、抑制細(xì)菌、促進(jìn)血管生成及重要的免疫作用。
　　 Hp基因型分為Hp1-1、Hp2-2、Hp1-2三種。心血管病的發(fā)病、預(yù)后是否與Hp的基因型有關(guān)一直存有爭(zhēng)議。國(guó)外很多大規(guī)模臨床實(shí)驗(yàn)都表明：Hp2-2基因型的糖尿病患者更容易出現(xiàn)心血管并發(fā)癥。其可能機(jī)制包括：不同基因型Hp其結(jié)構(gòu)不同，功能上存在差異；糖尿病患者有其自身生理病理特點(diǎn)，Hp的抗氧化能力被削弱。
　　 在中國(guó)人群中，Hp

5、基因型與合并冠心病的糖尿病患者的關(guān)系以及對(duì)冠心病病變程度一直未見(jiàn)報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)室通過(guò)差異凝膠電泳篩選與心血管病發(fā)生相關(guān)蛋白質(zhì)時(shí)，發(fā)現(xiàn)與健康人相比，心血管病患者血漿中Hp水平有明顯差異。本研究對(duì)結(jié)合珠蛋白基因型及其血漿水平與冠心病的關(guān)系進(jìn)行研究。
　　 研究目的
　　 1.研究冠心病組與對(duì)照組，結(jié)合珠蛋白（Haptoglobin，Hp）、高敏C-反應(yīng)蛋白（hs-CRP）等血漿水平的變化，并探討其與冠心病患者冠狀動(dòng)脈狹窄程度的

6、相關(guān)性。
　　 2.研究冠心病組、糖尿病合并冠心病組與對(duì)照組結(jié)合珠蛋白基因型和基因頻率分布的差異及不同基因型患者冠狀動(dòng)脈的狹窄程度差異。
　　 研究對(duì)象
　　 1.冠心病組
　　 2008年12月～2009年10月，阜外心血管病醫(yī)院住院的冠心病患者175例。
　　 2.對(duì)照組
　　 2008年12月～2009年10月到阜外心血管病醫(yī)院就診的心血管病患者121例，其中36例冠脈造影結(jié)果未見(jiàn)異

7、常，其余85例患者無(wú)冠心病癥狀并經(jīng)各項(xiàng)臨床檢查排除冠心病的診斷。
　　 3.糖尿病合并冠心病的組
　　 2008年12月～2010年10月入選48例明確診斷為糖尿病，同時(shí)在阜外心血管病醫(yī)院行冠脈造影至少有一支冠狀動(dòng)脈狹窄超過(guò)50％以上的冠心病患者。
　　 研究方法
　　 1.標(biāo)本采集
　　 （1）用于血生化檢測(cè)：于患者晨起空腹時(shí)，肘正中靜脈采血4ml，不抗凝。
　　 （2）用于血漿Hp水平

8、檢測(cè)及電泳蛋白分型：于患者晨起空腹時(shí)，肘正中靜脈采血4ml，EDTA抗凝。置于離心機(jī)內(nèi)以3000rmp/min離心10分鐘，收集上清液，置于-70℃冰箱保存?zhèn)溆谩?br>　　 2.結(jié)合珠蛋白電泳分型
　　 采用非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳，分離出Hp-Hb復(fù)合物（此復(fù)合物具有過(guò)氧化物酶的作用），再利用四甲基聯(lián)苯胺顯色的原理來(lái)判斷結(jié)合珠蛋白基因型。
　　 3.血清結(jié)合珠蛋白的測(cè)定
　　 采用美國(guó)貝克曼公司的IMMAG

9、E（）雙光路免疫濁度分析儀測(cè)定血清結(jié)合珠蛋白。
　　 4.冠狀動(dòng)脈病變狹窄程度的判定并根據(jù)積分進(jìn)行分組
　　 采用Gensini冠狀動(dòng)脈評(píng)分系統(tǒng)對(duì)冠狀動(dòng)脈的狹窄程度進(jìn)行評(píng)價(jià)。
　　 ◇ Gensini積分=各支冠狀動(dòng)脈病變積分之和。
　　 ◇每支冠狀動(dòng)脈病變積分=狹窄程度×病變的位置積分系數(shù)。
　　 根據(jù)冠脈造影結(jié)果的Gensini積分，將冠心病組分為3個(gè)亞組，分組標(biāo)準(zhǔn)為：亞組1：積分<50；亞組

10、2：積分≥50<90組；亞組3：積分≥90組。
　　 研究結(jié)果
　　 1.冠心病組與對(duì)照組血脂、Hp、Hs-CRP的差異
　　 （1）兩組間Hp、Hs-CRP水平的差異
　　 與對(duì)照組相比，冠心病組血漿中Hp、hs-CRP水平顯著升高，兩組間比較有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.01）。
　　 （2）兩組間血脂水平的差異
　　 兩組血漿TC、TG、LDL-C水平無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。而冠心病組血漿脂蛋白a

11、（Lpa）明顯升高，HDL-C明顯偏低，與對(duì)照組相比均有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0=01）。
　　 （3）冠心病組不同亞組問(wèn)的差異
　　 積分≥50<90組血漿hs-CRP、Hp水平比另外兩個(gè)亞組高，但三個(gè)亞組間的血脂、Hp、hs-CRP水平無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）。
　　 2.Hp基因型與冠心病病變程度的相關(guān)性
　　 （1）Hp基因頻率的差異
　　 對(duì)照組、冠心病組、合并冠心病的糖尿病組，其中H

12、p2-2基因型的出現(xiàn)頻率分別為51.81％（43/85例）、63.11％（65/103例）、56.25％（27/48例），三組間基因型分布頻率無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.387）。
　　 （2）不同基因型冠狀動(dòng)脈狹窄嚴(yán)重程度的差異
　　 ◇冠心病組中，Hp1-1/1-2與Hp2-2兩個(gè)亞組反映冠脈狹窄程度的Genisi積分分別為51.79±32.35和68.14±43.34，組間比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05）。
　　

13、 ◇合并冠心病的糖尿病組，Hp1-1/1-2與Hp2-2兩個(gè)亞組反映冠脈狹窄程度的Gensini積分分別為59.95±44.00、91.56±54.55，組間比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05）。
　　 研究結(jié)論
　　 1.本研究結(jié)果顯示，冠心病患者血漿中Hp、hs-CRP水平明顯升高，提示Hp、hs-CRP與冠心病的發(fā)生有關(guān)，但本研究未發(fā)現(xiàn)冠狀動(dòng)脈狹窄的嚴(yán)重程度與Hp、hs-CRP水平相關(guān)。
　　 2.本研究結(jié)果顯