結(jié)合珠蛋白基因型及血漿水平與冠心病相關(guān)性研究.pdf

1、研究背景
　　 由于冠狀動脈粥樣硬化所致的心臟病常稱為冠狀動脈粥樣硬化性心臟?。ê喎Q冠心病，Coronary Heart Disease CHD）。其病理過程是在內(nèi)皮損傷的基礎(chǔ)上出現(xiàn)冠狀動脈粥樣硬化，進(jìn)而產(chǎn)生粥樣斑塊，最終引起管腔狹窄甚至閉塞。內(nèi)皮功能損傷、巨噬細(xì)胞浸潤、泡沫細(xì)胞形成、平滑肌細(xì)胞增殖、血小板激活聚集以及血栓形成是其主要機制。氧化應(yīng)激與炎癥反應(yīng)在這一過程中起到重要作用，其中炎性反應(yīng)貫穿整個過程，越來越多的研究顯示冠

2、心病具有慢性炎癥的特征。
　　 急性時相反應(yīng)蛋白（Acute-phase-protein APP）包括C-反應(yīng)蛋白、轉(zhuǎn)鐵蛋白、血漿銅藍(lán)蛋白、結(jié)合珠蛋白（Haptoglobin）等，可用于鑒別急性、亞急性與慢性病理狀態(tài)，在一定程度上與病理損傷的性質(zhì)和范圍也有相關(guān)。C反應(yīng)蛋白（C-reactive protein，CRP）目前在臨床上已經(jīng)應(yīng)用的十分普遍，F(xiàn)ramingham的風(fēng)險積分表根據(jù)高敏C反應(yīng)蛋白水平將心血管患者分為低、中、高

3、危組。但是否其它ARP也能預(yù)測心血管疾病的發(fā)生危險以及心血管病的病變程度尚不清楚。
　　 結(jié)合珠蛋白（Haptoglobin，Hp）屬于急性時相反應(yīng)蛋白之一。它的主要功能是通過與游離血紅蛋白（heamoglobin，Hb）結(jié)合形成Hp-Hb復(fù)合物，該復(fù)合物能通過胞吞作用被巨噬細(xì)胞或單核細(xì)胞表面所表達(dá)的CD163攝取，最終轉(zhuǎn)化為可重復(fù)利用的鐵離子和膽紅素。Hp具有一定的抗氧化功能，其血清含量在腫瘤、炎癥、創(chuàng)傷、感染、心肌梗塞等病理

4、情況時常顯著升高。Hp尚有抑制前列腺素合成、抑制細(xì)菌、促進(jìn)血管生成及重要的免疫作用。
　　 Hp基因型分為Hp1-1、Hp2-2、Hp1-2三種。心血管病的發(fā)病、預(yù)后是否與Hp的基因型有關(guān)一直存有爭議。國外很多大規(guī)模臨床實驗都表明：Hp2-2基因型的糖尿病患者更容易出現(xiàn)心血管并發(fā)癥。其可能機制包括：不同基因型Hp其結(jié)構(gòu)不同，功能上存在差異；糖尿病患者有其自身生理病理特點，Hp的抗氧化能力被削弱。
　　 在中國人群中，Hp

5、基因型與合并冠心病的糖尿病患者的關(guān)系以及對冠心病病變程度一直未見報道。本實驗室通過差異凝膠電泳篩選與心血管病發(fā)生相關(guān)蛋白質(zhì)時，發(fā)現(xiàn)與健康人相比，心血管病患者血漿中Hp水平有明顯差異。本研究對結(jié)合珠蛋白基因型及其血漿水平與冠心病的關(guān)系進(jìn)行研究。
　　 研究目的
　　 1.研究冠心病組與對照組，結(jié)合珠蛋白（Haptoglobin，Hp）、高敏C-反應(yīng)蛋白（hs-CRP）等血漿水平的變化，并探討其與冠心病患者冠狀動脈狹窄程度的

6、相關(guān)性。
　　 2.研究冠心病組、糖尿病合并冠心病組與對照組結(jié)合珠蛋白基因型和基因頻率分布的差異及不同基因型患者冠狀動脈的狹窄程度差異。
　　 研究對象
　　 1.冠心病組
　　 2008年12月～2009年10月，阜外心血管病醫(yī)院住院的冠心病患者175例。
　　 2.對照組
　　 2008年12月～2009年10月到阜外心血管病醫(yī)院就診的心血管病患者121例，其中36例冠脈造影結(jié)果未見異

7、常，其余85例患者無冠心病癥狀并經(jīng)各項臨床檢查排除冠心病的診斷。
　　 3.糖尿病合并冠心病的組
　　 2008年12月～2010年10月入選48例明確診斷為糖尿病，同時在阜外心血管病醫(yī)院行冠脈造影至少有一支冠狀動脈狹窄超過50％以上的冠心病患者。
　　 研究方法
　　 1.標(biāo)本采集
　　 （1）用于血生化檢測：于患者晨起空腹時，肘正中靜脈采血4ml，不抗凝。
　　 （2）用于血漿Hp水平

8、檢測及電泳蛋白分型：于患者晨起空腹時，肘正中靜脈采血4ml，EDTA抗凝。置于離心機內(nèi)以3000rmp/min離心10分鐘，收集上清液，置于-70℃冰箱保存?zhèn)溆谩?br>　　 2.結(jié)合珠蛋白電泳分型
　　 采用非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳，分離出Hp-Hb復(fù)合物（此復(fù)合物具有過氧化物酶的作用），再利用四甲基聯(lián)苯胺顯色的原理來判斷結(jié)合珠蛋白基因型。
　　 3.血清結(jié)合珠蛋白的測定
　　 采用美國貝克曼公司的IMMAG

9、E（）雙光路免疫濁度分析儀測定血清結(jié)合珠蛋白。
　　 4.冠狀動脈病變狹窄程度的判定并根據(jù)積分進(jìn)行分組
　　 采用Gensini冠狀動脈評分系統(tǒng)對冠狀動脈的狹窄程度進(jìn)行評價。
　　 ◇ Gensini積分=各支冠狀動脈病變積分之和。
　　 ◇每支冠狀動脈病變積分=狹窄程度×病變的位置積分系數(shù)。
　　 根據(jù)冠脈造影結(jié)果的Gensini積分，將冠心病組分為3個亞組，分組標(biāo)準(zhǔn)為：亞組1：積分<50；亞組

10、2：積分≥50<90組；亞組3：積分≥90組。
　　 研究結(jié)果
　　 1.冠心病組與對照組血脂、Hp、Hs-CRP的差異
　　 （1）兩組間Hp、Hs-CRP水平的差異
　　 與對照組相比，冠心病組血漿中Hp、hs-CRP水平顯著升高，兩組間比較有顯著統(tǒng)計學(xué)差異（P<0.01）。
　　 （2）兩組間血脂水平的差異
　　 兩組血漿TC、TG、LDL-C水平無統(tǒng)計學(xué)差異。而冠心病組血漿脂蛋白a

11、（Lpa）明顯升高，HDL-C明顯偏低，與對照組相比均有顯著統(tǒng)計學(xué)差異（P<0=01）。
　　 （3）冠心病組不同亞組問的差異
　　 積分≥50<90組血漿hs-CRP、Hp水平比另外兩個亞組高，但三個亞組間的血脂、Hp、hs-CRP水平無統(tǒng)計學(xué)差異（P>0.05）。
　　 2.Hp基因型與冠心病病變程度的相關(guān)性
　　 （1）Hp基因頻率的差異
　　 對照組、冠心病組、合并冠心病的糖尿病組，其中H

12、p2-2基因型的出現(xiàn)頻率分別為51.81％（43/85例）、63.11％（65/103例）、56.25％（27/48例），三組間基因型分布頻率無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.387）。
　　 （2）不同基因型冠狀動脈狹窄嚴(yán)重程度的差異
　　 ◇冠心病組中，Hp1-1/1-2與Hp2-2兩個亞組反映冠脈狹窄程度的Genisi積分分別為51.79±32.35和68.14±43.34，組間比較有統(tǒng)計學(xué)差異（P<0.05）。
　　

13、 ◇合并冠心病的糖尿病組，Hp1-1/1-2與Hp2-2兩個亞組反映冠脈狹窄程度的Gensini積分分別為59.95±44.00、91.56±54.55，組間比較有統(tǒng)計學(xué)差異（P<0.05）。
　　 研究結(jié)論
　　 1.本研究結(jié)果顯示，冠心病患者血漿中Hp、hs-CRP水平明顯升高，提示Hp、hs-CRP與冠心病的發(fā)生有關(guān)，但本研究未發(fā)現(xiàn)冠狀動脈狹窄的嚴(yán)重程度與Hp、hs-CRP水平相關(guān)。
　　 2.本研究結(jié)果顯