鼠疫耶爾森氏菌與小鼠巨噬細(xì)胞蛋白相互作用的研究.pdf

1、鼠疫耶爾森氏菌是鼠疫的病原體，曾引發(fā)三次鼠疫世界大流行。鼠疫菌與宿主巨噬細(xì)胞的相互作用是其致病機(jī)制的重要環(huán)節(jié)。本研究試圖通過(guò)研究鼠疫耶爾森氏菌與巨噬細(xì)胞之間的蛋白相互作用進(jìn)一步深入了解鼠疫菌的致病機(jī)制。我們首先建立和優(yōu)化了蛋白芯片篩選鼠疫菌與巨噬細(xì)胞相互作用的方法，用包含149個(gè)鼠疫菌毒力相關(guān)蛋白的蛋白芯片篩選出17個(gè)能與巨噬細(xì)胞蛋白相互作用的鼠疫菌蛋白。其中除LcrG、YscW和YscB為鼠疫菌重要毒力因子低鈣響應(yīng)元件的成員、katY

2、為過(guò)氧化物歧化酶外，其余蛋白為推測(cè)的原噬菌體基因編碼蛋白或推測(cè)的未知功能蛋白。間接免疫熒光結(jié)果顯示8個(gè)芯片反應(yīng)中信號(hào)最強(qiáng)的蛋白LcrG，YscB，YscW，VpPCP1.06，YpMT1.25ac，YpMT1.24c，YPO2090，YPO2108均能與巨噬細(xì)胞相互作用，初步證實(shí)篩選結(jié)果比較可靠性。利用噬菌體重組技術(shù)構(gòu)建相應(yīng)蛋白表達(dá)缺陷的鼠疫菌突變株，分析突變株對(duì)巨噬細(xì)胞的細(xì)胞毒性和在BALB/c小鼠中的LD50，發(fā)現(xiàn)兩者的突變株在小鼠

3、模型中的毒力顯著下降，表明鼠疫菌LcrG和YscB蛋白在其致病機(jī)制中有非常重要的作用。利用細(xì)菌雙雜交技術(shù)以鼠疫菌LcrG和YscW蛋白為誘餌蛋白篩選巨噬細(xì)胞J774A.1的cDNA文庫(kù)，發(fā)現(xiàn)LcrG在巨噬細(xì)胞內(nèi)作用的靶蛋白為Rpl39和Txn2，YscW作用的靶蛋白為Rnf149。Trx-2和Rnf149分別為硫氧還原蛋白和RING結(jié)構(gòu)泛素連接酶相關(guān)的蛋白，它們?cè)诩?xì)胞的正常生理活動(dòng)中發(fā)揮重要的作用，與細(xì)胞的免疫響應(yīng)、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)等緊密相關(guān)。