平武產(chǎn)栽培天麻的品質(zhì)評價(jià)研究.pdf

1、天麻Gastrodia elata Bl.為蘭科天麻屬多年生寄生植物，以干燥塊莖入藥，具有息風(fēng)止痙，平抑肝陽，祛風(fēng)通絡(luò)之功。用于治療失眠、頭痛、耳鳴、肢體麻木、高血壓等癥。此外，天麻還用于食品、保健品、美容化妝品等，國內(nèi)外市場需求量大。目前國內(nèi)在陜西、云南、貴州、四川、湖北等地均有天麻種植，四川平武為天麻的野生道地產(chǎn)區(qū)，從二十世紀(jì)80年代開始進(jìn)行人工培育，至今已有近30年歷史。為配合企業(yè)和地方政府“天麻規(guī)范化種植SOP優(yōu)化升級及GAP認(rèn)

2、證”，本文采用傳統(tǒng)生藥研究方法，結(jié)合現(xiàn)代化學(xué)分析及分子生物學(xué)技術(shù)，對平武產(chǎn)栽培天麻進(jìn)行了系統(tǒng)的品質(zhì)評價(jià)研究，主要研究內(nèi)容及結(jié)果如下：
　　1對烏天麻、紅天麻、綠天麻進(jìn)行了較為系統(tǒng)的形態(tài)組織學(xué)對比研究，找出了其原植物、藥材性狀及顯微特征上的主要鑒別點(diǎn)；首次對三個(gè)不同品種天麻花粉塊進(jìn)行了掃描電鏡觀察，為其品種鑒定提供了參考依據(jù)。
　　1.1原植物形態(tài)上，主要從植株的高矮、莖的顏色、花序的長度、花的顏色等方面進(jìn)行鑒別。
　　

3、1.2藥材性狀上，三個(gè)不同品種天麻無明顯區(qū)別，僅在形狀、大小及表面的環(huán)節(jié)上稍有差異。
　　1.3顯微特征上，主要從塊莖橫切面下皮細(xì)胞列數(shù)、形狀、栓化程度，皮層細(xì)胞列數(shù)及外層細(xì)胞形狀等方面進(jìn)行鑒別。
　　1.4三個(gè)不同品種天麻花粉塊掃描電鏡觀察結(jié)果表明，其整體形態(tài)相似，但花粉粒大小、網(wǎng)脊等方面存在差異。相對于烏天麻，紅天麻與綠天麻花粉粒特征更為相似。
　　2在現(xiàn)行版《中國藥典》天麻薄層鑒別方法的基礎(chǔ)上，建立了信息量更為豐

4、富的薄層色譜鑒別法，并對不同產(chǎn)地、不同品種的天麻進(jìn)行了薄層色譜對比鑒別，找出了其異同點(diǎn)，為分析其化學(xué)成分的差異提供了參考依據(jù)。
　　通過對供試品溶液制備方法的改進(jìn)及展開系統(tǒng)、點(diǎn)樣量、展距等的考察，建立了信息量更為豐富的天麻薄層色譜鑒別方法，以三氯甲烷-甲醇-水-甲酸（3:1:0.1:0.1）為展開劑，分離效果較好，斑點(diǎn)清晰，Rf值適中。通過對20批樣品的薄層色譜對比鑒別，結(jié)果表明：四川平武產(chǎn)烏天麻、紅天麻、綠天麻的色譜斑點(diǎn)位置和顏

5、色相同，只是個(gè)別斑點(diǎn)顏色深淺有差異。其中綠天麻（16號樣品）在Rf=0.8位置的斑點(diǎn)色淺，與同產(chǎn)地的烏天麻、紅天麻存在細(xì)微差異。
　　不同產(chǎn)地烏天麻的色譜斑點(diǎn)的位置、數(shù)目基本一致，但是斑點(diǎn)顏色深淺差異較大，推測產(chǎn)地因素造成烏天麻一些成分量上的差異。不同產(chǎn)地紅天麻的色譜斑點(diǎn)數(shù)目存在差異，相同位置的斑點(diǎn)其顏色深淺也有不同，推測產(chǎn)地因素不僅引起紅天麻一些相同成分量上的差異，且成分類型也有所不同。
　　3建立了天麻HPLC指紋圖譜分

6、析方法，對比了同一產(chǎn)地不同品種及同一品種不同產(chǎn)地天麻在HPLC指紋圖譜上的異同，為進(jìn)一步深入研究奠定了基礎(chǔ)。
　　3.1通過對色譜條件的篩選、供試品溶液制備方法的選擇以及方法學(xué)考察，建立了天麻HPLC指紋圖譜分析方法。對20批天麻樣品指紋色譜圖的分析，確定13個(gè)峰作為特征峰的對照指紋圖譜。建立的方法穩(wěn)定可靠、重復(fù)性好，可用于天麻化學(xué)成分信息的總體對比研究。
　　3.2相似度分析結(jié)果表明20個(gè)樣品中除1號（平武高村烏天麻）、7

7、號（平武高村紅天麻）、18號（湖北宜昌雜交）、20（市場商品天麻）外，相似度均達(dá)0.9以上，說明16批天麻藥材化學(xué)成分大致相同。
　　3.3聚類分析結(jié)果表明20批樣品以距離20劃分，可聚為A、B兩類，其中4號（平武南壩烏天麻）、10號（平武南壩紅天麻）樣品聚為一類，其他樣品聚為一類。觀察聚類分析圖發(fā)現(xiàn)5號（貴州烏天麻）、13號（貴州紅天麻）、20號（市場商品）聚為一類；1號（平武烏天麻）、7號（平武紅天麻）聚為一類；推測同一產(chǎn)地烏

8、天麻與紅天麻在化學(xué)成分上的相似性。
　　3.4四川平武產(chǎn)烏天麻和紅天麻的HPLC指紋圖譜相似度較高，表明其化學(xué)成分趨同，綠天麻與其他兩個(gè)品種指紋圖譜上存在差異，但由于其樣品量少，需進(jìn)一步試驗(yàn)；而不同產(chǎn)地的烏天麻、紅天麻在出峰數(shù)目及峰面積大小上有明顯差別，差異較大，表明產(chǎn)地因素對其化學(xué)成分的影響較大。
　　4建立了天麻多糖含量的紫外分光光度法測定方法，進(jìn)行了天麻浸出物、天麻素、多糖含量測定，并采用加權(quán)評分法對測定結(jié)果進(jìn)行綜合評

9、價(jià)，為弄清平武栽培天麻的質(zhì)量狀況提供了參考依據(jù)。
　　4.1按照2010版《中國藥典》醇溶性浸出物測定法（附錄X A）項(xiàng)下的熱浸法測定20批天麻樣品，其中浸出物含量最高為17.79％，最低為6.78%。有6批不符合現(xiàn)行版《中國藥典》規(guī)定（不得少于10.0%）。
　　四川平武產(chǎn)天麻浸出物含量以烏天麻較高，紅天麻較低。綠天麻雖浸出物含量較高，為13.57%，但因樣品量較少，尚需進(jìn)一步試驗(yàn)。不同產(chǎn)地同一品種的天麻浸出物含量有差異，

10、烏天麻以2號（四川平武）、5號（貴州大方）樣品的含量較高；紅天麻以12號（四川廣元）、8號（四川平武）樣品的含量較高。
　　4.2按照2010版《中國藥典》天麻項(xiàng)下含量測定方法測定20批樣品的天麻素含量，其中天麻素含量最高為0.75%，最低為0.22%。所有樣品均符合現(xiàn)行版《中國藥典》規(guī)定（不得少于0.2%）
　　四川平武產(chǎn)天麻以烏天麻天麻素含量較高，紅天麻次之，綠天麻最低。不同產(chǎn)地同一品種的天麻其天麻素含量有差異，烏天麻以

11、5號（貴州大方）、4號（四川平武）樣品含量較高，紅天麻以14號（湖北宜昌）、12號（四川廣元）、11號（四川平武）樣品的含量較高。
　　4.3通過供試品溶液的制備與方法學(xué)考察，建立了天麻多糖含量的紫外分光光度法測定方法，并對20批天麻樣品進(jìn)行了多糖含量的測定。
　　四川平武產(chǎn)天麻多糖含量以烏天麻較高，紅天麻次之。綠天麻多糖含量最高可達(dá)32.5%。不同產(chǎn)地同一品種的天麻其多糖含量有差異，烏天麻以4號（四川平武）樣品的含量較高，

12、紅天麻以14號（湖北宜昌）、10號（四川平武）樣品的含量較高。
　　4.4采用加權(quán)評分法對20批樣品的浸出物、天麻素、多糖含量進(jìn)行綜合評分，結(jié)果表明，烏天麻以四川平武各鄉(xiāng)鎮(zhèn)的得分較高；紅天麻以湖北宜昌、四川平武的得分較高；同一產(chǎn)地不同品種天麻比較，烏天麻優(yōu)于紅天麻。
　　5首次采用SRAP分子標(biāo)記方法研究不同品種天麻親緣關(guān)系，通過對天麻DNA提取方法、PCR條件、電泳條件等方面的考察，建立天麻SRAP分析方法，對不同品種天麻