海參精囊提取物對(duì)雄性生殖系統(tǒng)保護(hù)作用的研究.pdf

1、目的：本文旨在探討海參精囊提取物對(duì)環(huán)磷酰胺導(dǎo)致的中老年男性雄激素部分缺乏綜合征(PADAM)模型小鼠生殖系統(tǒng)的保護(hù)作用。
　　方法：
　　1、采用水溶液超聲提取的方法得到海參精囊中的水溶性物質(zhì);采用乙醇等有機(jī)溶劑提取的方法得到海參精囊中的脂溶性物質(zhì)。
　　2、采用電感耦合等離子體質(zhì)譜法測(cè)定凍干粉中微量元素含量;按照GB5009相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)測(cè)定凍干粉中水分、灰分、蛋白質(zhì)和脂肪含量。
　　3、昆明種小鼠隨機(jī)分成9組:正常

2、空白組，模型對(duì)照組，海參精囊水提物低、中、高劑量組，海參精囊醇提物低、中、高劑量組以及陽性藥物組。除正?？瞻捉M用生理鹽水外其他各組均腹腔注射環(huán)磷酰胺(CP，28 mg/kg)，每天1次，連續(xù)5天，復(fù)制生殖系統(tǒng)受損、雄激素部分缺乏模型;同時(shí)治療組每天灌胃不同劑量(150、300、600mg/kg)的海參精囊提取物1次，陽性藥物組灌胃甲基睪酮溶液（1.5mg/kg）1次，連續(xù)4周。觀察精子總數(shù)、運(yùn)動(dòng)率和畸形率，計(jì)算臟器指數(shù)，檢測(cè)血清中睪酮含

3、量，觀察睪丸組織切片中生精上皮的厚度和生精細(xì)胞的數(shù)量;檢測(cè)睪丸組織總超氧化物歧化酶(T-SOD)活性、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)活性和丙二醛(MDA)含量;原位末端標(biāo)記法（TUNEL）檢測(cè)睪丸組織凋亡生精細(xì)胞，免疫組化法檢測(cè)Bcl-2、Bax和Caspase-3蛋白的分布和表達(dá)，并與模型對(duì)照組進(jìn)行比較。
　　結(jié)果：
　　1、水溶液超聲提取，料液比1∶3，30℃條件下超聲25 min，提取2h，提率為8.4％;有機(jī)溶劑

4、提取，料液比1∶10，30℃條件下提取3h，提率為23.9％。
　　2、海參精囊凍干粉中含有大量的人體必需的營養(yǎng)成分，其中蛋白質(zhì)、Fe、Ca、Mg、Zn、Se含量豐富，分別為61.3％、5752、2407、2696、87.6、10.5 mg/kg;同時(shí)也檢測(cè)出Cr、As和Pb3種有害重金屬含量已嚴(yán)重超出我國無公害水產(chǎn)品幾種有害重金屬限量衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)，分別為2.48、12、0.7 mg/kg。
　　3、與正常空白組比較，模型對(duì)照組

5、小鼠的血清睪酮含量、精子總數(shù)、精子運(yùn)動(dòng)率、睪丸指數(shù)和胸腺指數(shù)明顯降低，精子畸形率明顯升高(P＜0.01)，附睪指數(shù)與脾指數(shù)的變化也具有顯著性差異(P＜0.05)。雖然海參精囊提取物高、低劑量間無明顯差異(P＞0.05)，但相對(duì)于模型對(duì)照組來說，給藥各組均能顯著改善生殖系統(tǒng)受損小鼠的上述各項(xiàng)指標(biāo)(P＜0.01)，甚至接近或優(yōu)于正常水平。睪丸組織病理結(jié)果顯示，與正常空白組比較，模型對(duì)照組小鼠生精上皮變薄，差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)，

6、并且生精細(xì)胞的數(shù)量明顯減少(P＜0.01)。相較于模型對(duì)照組，海參精囊提取物能緩解環(huán)磷酰胺的這一毒性作用，生精上皮厚度和生精細(xì)胞數(shù)量均有顯著改善(P＜0.01)。
　　4、與正?？瞻捉M相比，模型對(duì)照組小鼠睪丸組織的T-SOD和GSH-Px活性顯著降低，MDA含量顯著升高(P＜0.05、0.01)。而海參精囊提取物可以顯著提高睪丸組織的抗氧化能力，降低MDA含量，與模型對(duì)照組相比差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05、0.01)。

7、　　5、TUNEL法結(jié)果顯示，與正?？瞻捉M相比，模型對(duì)照組小鼠睪丸生精細(xì)胞凋亡指數(shù)顯著增高(P＜0.01);海參精囊提取物可以顯著減少生精細(xì)胞的凋亡，與模型對(duì)照組相比具有顯著性差異（P＜0.05、0.01）。免疫組化結(jié)果顯示，模型對(duì)照組小鼠睪丸組織中Bax和Caspase-3的表達(dá)較正常空白組明顯增多，而Bcl-2蛋白的表達(dá)明顯降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。海參精囊提取物可以拮抗環(huán)磷酰胺的生殖毒性，使Bcl-2的表達(dá)增多，B

8、ax和Caspase-3的表達(dá)減少，與模型對(duì)照組相比差異顯著(P＜0.05、0.01）。
　　結(jié)論：
　　1、海參精囊凍干粉中含有大量人體所需的微量元素，并且高蛋白、低脂肪，營養(yǎng)價(jià)值豐富。
　　2、海參精囊提取物能顯著提高受損小鼠的血清睪酮含量，具有一定的睪酮替代作用，避免了PADAM患者因補(bǔ)充睪酮而產(chǎn)生的副作用。同時(shí)能夠改善生精小管的結(jié)構(gòu)，顯著提高生精細(xì)胞和精子的數(shù)量以及精子的運(yùn)動(dòng)率，降低精子的畸形率，提高小鼠的睪丸