EGCG對急性UVB輻射后表皮角質形成細胞的保護機制探討及對慢性UVA輻射后小鼠皮膚光老化的防護作用.pdf

1、EGCG對急性UVB照射HaCaT細胞保護機制的探討研究背景： 日光中的長波紫外線(UVA)和中波紫外線(UVB)輻射可引起急性損傷如日曬傷和慢性累積性損傷如光老化及皮膚癌，對人類健康構成潛在危害。波長短能量較高的UVB(290-320nm)主要作用于表皮，角質形成細胞是其靶細胞，可誘導皮膚不良反應如紅斑、水腫、水皰、皮膚色素沉著、異常增生、光老化和非黑色素皮膚癌，而機體通過多種保護性措施如凋亡和炎癥來保護皮膚監(jiān)視及對抗?jié)撛谥掳?/p>

2、細胞的增殖。 近幾年紫外線誘導的炎癥反應和細胞惡性轉化過程中信號通路的作用受到廣泛關注，其中一個研究熱點即是絲裂原活化蛋白激酶(MAPK)信號轉導通路，該途徑可被紫外線激活，故在調節(jié)紫外線誘導的多重細胞反應中至關重要。MAPK主要由以下四個家族組成：ERK,JNK,p38和ERK5/BMK1，其中p38介導的炎癥反應和凋亡在維護表皮完整性和對抗紫外線誘導的腫瘤效應方面具有重要作用。 綠茶是全球廣泛受歡迎的飲料，綠茶中的酚

3、類是兒茶素，其中的沒食子兒茶素沒食子酸酯(EGCG)是有效的自由基清除劑和抗氧化劑，可以預防化學致癌作用和紫外線誘導的氧化應激效應。我們以前的研究證實單次UVB輻射可引起急性光損傷包括細胞活性減低及增殖減慢、細胞凋亡增加、光加合物形成增多。累積性UVA/UVB照射甚至可以導致DNA突變及皮膚癌發(fā)生，當加入EGCG干預后，均可以減少UVB照射所致上述各種損傷性改變，但關于p38絲裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)信號途徑在UVB所致凋亡及

4、炎癥中的作用，及其EGCG的保護機制是否也與此途徑有關在國內尚未見報告，因此我們以人皮膚角質形成細胞株HaCaT為觀察對象，研究p38MAPK途徑在UVB照射誘導的細胞凋亡及炎癥介質分泌活動中的作用，并以p38抑制劑為陽性參照對比觀察EGCG的干預保護作用是否也與p38MAPK通路有關。 目的：第一部分研究UVB輻射引起HaCaT細胞發(fā)生凋亡的概率、細胞因子TNF-α、IL-1β及IL-6的分泌及p38MAPK和磷化p38絲裂原

5、活化蛋白激酶(p-p38MAPK)的表達，探討凋亡、細胞因子分泌與p38MAPK之間的聯(lián)系，確定p38MAPK信號轉導途徑是否參與了UVB誘導的細胞凋亡及細胞因子的分泌。第二部分研究EGCG對UVB輻射后細胞凋亡、細胞因子分泌及p38MAPK、p-p38MAPK表達的影響，探討EGCG的光保護機制是否也與p38MAPK通路有關。 方法：使用0,20，30，40，60，70及90mJ/cm2UVB照射HaCaT細胞，照射后0h，1

6、h，2h，3h，4h，6h，24h及48h收集細胞和上清。流式細胞儀檢測細胞周期和凋亡；ELISA檢測上清液中TNF-α、IL-1β、IL-6水平；WestemBlot方法檢測p38MAPK和p-p38MAPK的表達。 結果：①與空白對照組細胞凋亡率(O)相比，30mJ/cm2UVB照射后24h，HaCaT細胞凋亡率為21.25±0.33％，應用p38抑制劑后測細胞凋亡率降為10.14±0.27％，較UVB組降低1/2。②30m

7、J/cm2UVB照射HaCaT細胞，照射后HacaT細胞分泌TNF-α漸增加，24h達高峰，后漸下降，p38抑制劑SB203580完全抑制TNF-α的分泌。UVB輻射后IL-1β，IL-6則隨孵育時間而大幅度增加，SB203580明顯抑制了IL-1β和IL-6的分泌水平。③不同劑量UVB照射后可激活HaCaT細胞p38MAPK途徑，磷酸化p-p38水平增高，照光組與非照光組間相比具有統(tǒng)計學意義。以30mJ/cm2UVB照射時p-p38表

8、達量最高，但非磷酸化p38表達量沒有類似明顯變化。以上數(shù)據(jù)說明急性UVB照射后p38MAPK途徑的激活、細胞因子的分泌及凋亡細胞的增加之間存在時間先后上的調控關系，即p38MAPK信號通路中p38的快速磷酸化參與調控了后續(xù)的細胞因子的分泌活動及其由炎癥介質介導的細胞凋亡作用。另外本實驗結果顯示p38抑制劑不能抑制UVB對p38磷酸化的誘導作用。④應用EGCG后細胞凋亡率降為6.63±7.5％，同時加入EGCG能部分抑制p-p38MAPK