Genistein對人卵巢癌裸鼠皮下移植瘤的抑制作用及對cyclinB1、cyclinD1蛋白表達(dá)的影響.pdf

1、卵巢癌在女性生殖器官惡性腫瘤中死亡率居首位，近年來，盡管化療取得了重要進(jìn)展，但5年生存率仍無明顯提高，因此尋找治療卵巢癌的新型藥物及新型作用靶點(diǎn)已成為迫切的需要。
　　 Genistein又稱染料木黃酮，最初是從大豆中提取出來的一種植物雌激素，作為酪氨酸蛋白激酶的特異性抑制劑，近年來國內(nèi)外許多研究表明它可抑制乳腺癌、膀胱癌、胃癌、肝癌、卵巢癌等多種腫瘤的生長。我們的前期研究已證實(shí)，genistein對卵巢癌CAOV3細(xì)胞的增殖具

2、有抑制作用。王心等通過胃灌注人卵巢癌裸鼠移植瘤模型20例的研究表明，genistein可通過抑制卵巢癌細(xì)胞增殖和微血管生成發(fā)揮抑瘤作用。本研究選用臨床上常用的腹腔注射給藥途徑，探討genistein對人卵巢癌裸鼠皮下移植瘤的抑制作用及對細(xì)胞周期蛋白cyclinB1、cyclinD1表達(dá)的影響。
　　 材料和方法：
　　 一、材料
　　 1、研究對象
　　 人卵巢癌HO-8910細(xì)胞購自于上海生命科學(xué)院細(xì)胞

3、資源中心。BALB/c遺傳背景的、nu/nu雌性裸鼠作為實(shí)驗動物，4-6周齡，體重18-22g，購自上海斯萊克實(shí)驗動物中心，飼養(yǎng)于中國醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗動物中心SPF級環(huán)境中。
　　 2、主要儀器
　　 超凈工作臺、二氧化碳培養(yǎng)箱、冰箱、倒置顯微鏡及照相系統(tǒng)、離心沉淀機(jī)、恒溫振蕩器、游標(biāo)卡尺、電子分析天平、水平搖床、電泳儀、轉(zhuǎn)印電泳槽、垂直板電泳裝置、紫外分光光度計、凝膠電泳成像分析系統(tǒng)。
　　 3、主要試劑
　

4、　 Genistein、DMEM培養(yǎng)基、DMSO、PBS緩沖液、胰蛋白酶、小牛血清、青霉素、鏈霉素、鼠抗人cyclinB1單克隆抗體、鼠抗人cyclinD1單克隆抗體、堿性磷酸酶標(biāo)記山羊抗鼠第二抗體、堿性磷酸酶顯色試劑盒、o-dianidine、β-naphthylacidphosphate、硝酸纖維素膜、十二烷基磺酸鈉（SDS）、三羥甲基氨基甲烷（Tris）、丙烯酰胺（Acr）、甲醇。
　　 二、方法
　　 1、藥品

5、配置
　　 Genistein用二甲基亞砜（DMSO）配成儲備液，置于-20℃保存。實(shí)驗時用DMEM培養(yǎng)基稀釋成所需濃度。
　　 2、細(xì)胞培養(yǎng)
　　 人卵巢癌HO-8910細(xì)胞在含10％小牛血清、100U/ml青霉素、100μg/ml鏈霉素的DMEM培養(yǎng)基中貼壁生長，于37℃、5％二氧化碳培養(yǎng)箱中傳代培養(yǎng)。
　　 3、卵巢癌裸鼠皮下移植瘤模型的建立
　　 用DMEM加10％小牛血清培養(yǎng)人卵巢癌HO

6、-8910細(xì)胞，細(xì)胞按1×107/mL懸浮于無血清培養(yǎng)基中，每只裸鼠右腋下皮下接種0.2mL，約7-10天可形成肉眼可見的瘤塊，直至瘤塊長至直徑約5mm時開始腹腔給藥。
　　 4、動物實(shí)驗
　　 通過建立人卵巢癌裸鼠皮下移植瘤模型，探討genistein對卵巢癌是否具有抑制作用。
　　 5、Westernblot法
　　 檢測genistein對人卵巢癌裸鼠皮下移植瘤組織中cyclinB1、cyclinD

7、1蛋白表達(dá)的影響。
　　 6、統(tǒng)計學(xué)方法
　　 應(yīng)用統(tǒng)計學(xué)軟件SPSS13.0對成組計量資料組間差異進(jìn)行t檢驗，P<0.05差異有顯著性。
　　 結(jié)果：
　　 1、人卵巢癌裸鼠皮下移植瘤模型的建立及genistein對其是否具有抑制作用的研究：成功建立卵巢癌裸鼠皮下移植瘤模型，腹腔注射給藥等實(shí)驗過程順利，將genistein各劑量組與對照組作比較，genistein低、中、高劑量組移植瘤生長抑制均顯著（P

8、<0.05）。
　　 本實(shí)驗每天給予荷瘤裸鼠不同劑量的genistein連續(xù)治療21天，治療過程中及治療后觀察荷瘤裸鼠的生長、活動、飲食等一般狀態(tài)未見明顯異常，治療前、后體重?zé)o顯著差異（P>0.05）。
　　 2、Genistein對人卵巢癌裸鼠皮下移植瘤組織中cyclinB1和cyclinD1蛋白的表達(dá)的影響：Westernblot結(jié)果顯示，與對照組比較，genistein低、中、高劑量組處理后cyclinB1蛋白表達(dá)