NADPH氧化酶在角膜堿燒傷中作用的研究.pdf

1、目的：探討NADPH氧化酶（NOXs）在小鼠堿燒傷模型中的作用。
　　方法：將6-8周的C57小鼠右眼建立堿燒傷模型。免疫熒光用于觀察NOXs在人堿燒傷角膜以及小鼠堿燒傷角膜的表達(dá)情況。免疫印跡和實時熒光PCR法用于檢測 NOXs在小鼠堿燒傷模型中的表達(dá)情況。小鼠動物模型分為4組：左眼作為正常對照組、實驗對照組（PBS組）、DPI給藥組、APO給藥組。裂隙燈下觀察3天、7天、14天各組小鼠堿燒傷后角膜的新生血管生長情況。堿燒傷后7

2、天應(yīng)用免疫熒光法檢測各組3-NT（3-硝基絡(luò)氨酸）、CD11b的蛋白表達(dá)情況，免疫印跡法檢測各組3-NT的蛋白表達(dá)情況，實時熒光 PCR法檢測各組炎癥因子（TNF-α，IL-1β，IL-6），血管生長因子（VEGF，VEGFR1，VEGFR2）表達(dá)情況。CellROX試劑用于ROS的含量檢測。堿燒傷后14天應(yīng)用熒光素鈉造影觀察新生管的變化情況。
　　結(jié)果：免疫熒光結(jié)果顯示在角膜堿燒傷中NOX2和NOX4表達(dá)量明顯升高。免疫印跡法以

3、及熒光定量PCR檢測結(jié)果顯示，與正常組相比，堿燒傷組Nox2、Nox4蛋白以及mRNA水平明顯增加。NADPH氧化酶抑制劑應(yīng)用后，免疫熒光染色檢測顯示：DPI以及Apo可以顯著減少堿燒傷后CD11b的表達(dá)升高。熒光定量PCR檢測結(jié)果顯示，炎癥因子IL-1β和IL-6的mRNA表達(dá)水平在堿燒傷中顯著高于正常角膜中，DPI以及APO可以顯著地降低IL-1β和IL-6的mRNA表達(dá)水平；然而 TNF-α的mRNA表達(dá)水平在各組間沒有顯著差異；

4、VEGF、VEGFR1、VEGFR2的mRNA表達(dá)水平在堿燒傷中顯著高于正常角膜中，在DPI組以及APO組中可以顯著地降低。ROS的含量檢測顯示，堿燒傷后ROS的含量顯著增加，DPI以及Apo可以顯著地減少ROS的含量。心臟灌注熒光素鈉角膜鋪片結(jié)果顯示：堿燒傷后角膜新生血管的面積顯著高于正常組，DPI以及Apo可以顯著減少角膜新生血管的面積。
　　結(jié)論：在角膜堿燒傷中NADPH氧化酶明顯升高。抑制NADPH氧化酶可以減緩堿燒傷對角