不同濃度慶大霉素對大鼠脂肪干細(xì)胞體外軟骨形成能力影響的研究.pdf

1、目的：本文研究大鼠脂肪干細(xì)胞(adipose-derived stem cellsADSCs)在體外分離培養(yǎng)、誘導(dǎo)分化為成軟骨的能力,并初步觀察不同濃度(0μg/m、10μg/ml、50μg/ml、100μg/ml、200μg/ml)慶大霉素對其增殖、分化成軟骨的影響。
　　 方法：從3周齡SD大鼠腹股溝脂肪墊分離出脂肪組織,通過I型膠原酶消化法分離干細(xì)胞,型膠原酶消化法分離干細(xì)胞,接種于含有胎牛血清的DMEM培養(yǎng)液中分離傳代。

2、每日以倒置顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)及生長情況。取第三代脂肪干細(xì)胞分五組,包含一個對照組(培養(yǎng)液為人脂肪干細(xì)胞完全培養(yǎng)基:高糖DMEM、10％胎牛血清、50nmol/L抗壞血酸、6.25mg/L胰島素、100U/ml青霉素、100μg/ml鏈霉素、100nmol/L地塞米松,10μg/L轉(zhuǎn)化生長因子β1,不含慶大霉素)和四個含慶大霉素濃度組(分別是10μg/ml、50μg/ml、100μg/ml、200μg/ml加入脂肪干細(xì)胞完全培養(yǎng)基)。采用

3、MTT比色法進(jìn)行增殖活性比較,Ⅱ型膠原免疫細(xì)胞化學(xué)染色和細(xì)胞甲苯胺藍(lán)染色檢測成軟骨分化情況。
　　 結(jié)果：1.體外培養(yǎng)的脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞呈扁平的梭形成纖維樣細(xì)胞生長,且細(xì)胞形態(tài)均一,傳代穩(wěn)定。2.MTT實(shí)驗(yàn)顯示慶大霉素在100μg/ml、200μg/ml抑制細(xì)胞增殖,其余各濃度組對細(xì)胞增殖無明顯影響3.誘導(dǎo)后細(xì)胞甲苯胺藍(lán)染色顯示100μg/ml組及200μg/ml組細(xì)胞細(xì)胞染色較淺,大部分細(xì)胞失染,余各組陽性表達(dá):Ⅱ型膠原免疫組