染色體8p上肝癌轉(zhuǎn)移相關(guān)基因的篩選與初步驗證.pdf

1、目的：已發(fā)現(xiàn)人類多種類型的腫瘤中存在8號染色體短臂(8p)的改變；本所既往的研究發(fā)現(xiàn)染色體8p缺失與肝癌轉(zhuǎn)移有關(guān)，為進一步篩選肝癌轉(zhuǎn)移相關(guān)基因提供了靶點。本課題擬在此基礎(chǔ)上，從基因表達水平進一步探討染色體8p與肝癌轉(zhuǎn)移的關(guān)系，并且篩選出定位于染色體8p的與肝癌轉(zhuǎn)移相關(guān)的基因。 方法：首先定制包括染色體8P上全部322個基因的寡核苷酸芯片。然后運用定制芯片，以10例來自肝海綿狀血管瘤患者的正常肝臟組織RNA混合后形成的樣本池為對照

2、，檢測伴、或不伴有轉(zhuǎn)移的肝癌組織標本各20例(20例伴有轉(zhuǎn)移者，同時檢測肝癌原發(fā)瘤和轉(zhuǎn)移灶組織標本)中相關(guān)基因的表達水平。在不同轉(zhuǎn)移潛能的細胞株(包括無轉(zhuǎn)移潛能肝癌細胞株Hep3B、低轉(zhuǎn)移潛能肝癌細胞株MHCC97-L、高轉(zhuǎn)移潛能細胞株MHCC-LM6，正常對照采用正常肝細胞株Changliver)中進一步驗證。經(jīng)過芯片雜交掃描統(tǒng)計分析后得出位于染色體8P上的與肝癌轉(zhuǎn)移相關(guān)的基因。并用RT-PCR和Real-timePCR對篩選出的基因

3、進行了初步驗證。 結(jié)果：不同轉(zhuǎn)移潛能的肝癌組織或細胞較正常肝組織或細胞均存在差異表達的基因；當熒光強度設定為大于800的水平時，在80％的肝癌組織中存在差異表達的情況下，篩選出了DEFB1,MSRA,CLU,FGL1等在高轉(zhuǎn)移潛能的肝癌組織中明顯下調(diào)的差異表達基因，并且在不同轉(zhuǎn)移潛能的細胞系中進一步得到證實。RT-PCR和Real-timePCR實驗也表明它們在伴轉(zhuǎn)移的肝癌組織中顯著下調(diào)。 結(jié)論：染色體8p與肝癌轉(zhuǎn)移相關(guān)