染色體8p上肝癌轉(zhuǎn)移相關(guān)基因的篩選與初步驗(yàn)證.pdf

1、目的：已發(fā)現(xiàn)人類多種類型的腫瘤中存在8號(hào)染色體短臂(8p)的改變；本所既往的研究發(fā)現(xiàn)染色體8p缺失與肝癌轉(zhuǎn)移有關(guān)，為進(jìn)一步篩選肝癌轉(zhuǎn)移相關(guān)基因提供了靶點(diǎn)。本課題擬在此基礎(chǔ)上，從基因表達(dá)水平進(jìn)一步探討染色體8p與肝癌轉(zhuǎn)移的關(guān)系，并且篩選出定位于染色體8p的與肝癌轉(zhuǎn)移相關(guān)的基因。 方法：首先定制包括染色體8P上全部322個(gè)基因的寡核苷酸芯片。然后運(yùn)用定制芯片，以10例來自肝海綿狀血管瘤患者的正常肝臟組織RNA混合后形成的樣本池為對(duì)照

2、，檢測(cè)伴、或不伴有轉(zhuǎn)移的肝癌組織標(biāo)本各20例(20例伴有轉(zhuǎn)移者，同時(shí)檢測(cè)肝癌原發(fā)瘤和轉(zhuǎn)移灶組織標(biāo)本)中相關(guān)基因的表達(dá)水平。在不同轉(zhuǎn)移潛能的細(xì)胞株(包括無轉(zhuǎn)移潛能肝癌細(xì)胞株Hep3B、低轉(zhuǎn)移潛能肝癌細(xì)胞株MHCC97-L、高轉(zhuǎn)移潛能細(xì)胞株MHCC-LM6，正常對(duì)照采用正常肝細(xì)胞株Changliver)中進(jìn)一步驗(yàn)證。經(jīng)過芯片雜交掃描統(tǒng)計(jì)分析后得出位于染色體8P上的與肝癌轉(zhuǎn)移相關(guān)的基因。并用RT-PCR和Real-timePCR對(duì)篩選出的基因

3、進(jìn)行了初步驗(yàn)證。 結(jié)果：不同轉(zhuǎn)移潛能的肝癌組織或細(xì)胞較正常肝組織或細(xì)胞均存在差異表達(dá)的基因；當(dāng)熒光強(qiáng)度設(shè)定為大于800的水平時(shí)，在80％的肝癌組織中存在差異表達(dá)的情況下，篩選出了DEFB1,MSRA,CLU,FGL1等在高轉(zhuǎn)移潛能的肝癌組織中明顯下調(diào)的差異表達(dá)基因，并且在不同轉(zhuǎn)移潛能的細(xì)胞系中進(jìn)一步得到證實(shí)。RT-PCR和Real-timePCR實(shí)驗(yàn)也表明它們?cè)诎檗D(zhuǎn)移的肝癌組織中顯著下調(diào)。 結(jié)論：染色體8p與肝癌轉(zhuǎn)移相關(guān)