IRS-PCR診斷肺炎支原體肺炎的臨床應(yīng)用與評價.pdf

1、目的：
　　 肺炎支原體(Mycoplasma pneumoniae，MP)是介于細菌與病毒之間，無細胞壁的一類原核細胞型生物。它不但是原發(fā)性非典型肺炎的重要病原體，也是成年人社區(qū)獲得性肺炎的常見病原之一。近年來由于肺炎支原體感染的發(fā)病率不斷升高，使人們對早期、快速檢測肺炎支原體感染的方法越來越重視?，F(xiàn)在臨床上常用的肺炎支原體分離培養(yǎng)和血清學(xué)方法敏感性低，特異性差，耗時長，易出現(xiàn)假陰性，不能很好的滿足臨床需要。近年P(guān)CR技術(shù)的發(fā)

2、展，為建立可靠、快速的肺炎支原體早期診斷方法提供了可能。Dr.Jensen報道的touch-down PCR方法和Dr.Alfred報道的PCR方法是檢測肺炎支原體感染較為常見的方法，具有較高的靈敏度和特異性。本研究通過IRS-PCR方法與Dr.Jensen和Dr.Alfred的PCR方法的比較，評價IRS-PCR在診斷肺炎支原體肺炎中的應(yīng)用價值。
　　 方法：
　　 1.標(biāo)本來源:天津市某醫(yī)院就診的急性呼吸道感染患兒，

3、共121例。由專業(yè)人員采集患兒咽拭子。從咽拭子中提取肺炎支原體DNA。
　　 2.用三種PCR方法對121例患者進行肺炎支原體檢測。三種方法分別是IRS-PCR、Dr.Jensen的PCR和Dr.Alfred的PCR方法。對三種方法檢測結(jié)果有差異的標(biāo)本進行測序。
　　 3.敏感性評價方法:用ddH2O10倍倍比稀釋肺炎支原體標(biāo)準(zhǔn)菌株Mac提取的DNA，最終得到10個濃度遞減的DNA樣本，用三種PCR方法檢測，可以判斷三種

4、方法的敏感性。
　　 4.特異性評價方法:以14種病原體的DNA為模板，分別用三種PCR方法擴增，用2％的瓊脂糖凝膠電泳分析結(jié)果來判斷這三種方法的特異性。
　　 結(jié)果：
　　 1.IRS-PCR檢出42例陽性患者，陽性率34.71％。Dr.Jensen的PCR檢出46例陽性，陽性率38.01％，Dr.Alfred的PCR檢出44例陽性，陽性率36.04％。三種PCR方法檢測的結(jié)果不一致的標(biāo)本:12、15、21和3

5、0，送測序，其結(jié)果為:12和15號標(biāo)本陰性，21號和30號標(biāo)本為陽性。
　　 2.IRS-PCR方法和Dr.Alfred的PCR方法的敏感性優(yōu)于Dr.Jensen的PCR方法。
　　 3.標(biāo)準(zhǔn)株Mac用IRS-PCR方法擴增，可擴增出503-525bp大小的特異性條帶，大腸埃希菌用此法擴增出600bp左右大小的條帶，因為大腸埃希菌擴增出的條帶與目的條帶大小差異大，距離比較遠，不影響檢測結(jié)果的特異性。Dr.Jensen的P

6、CR和Dr.Alfred的PCR除了標(biāo)準(zhǔn)株Mac擴出特異性條帶外，其余病原體均未發(fā)現(xiàn)非特異性條帶。三種方法均有高度的特異性。
　　 結(jié)論：
　　 1.IRS-PCR方法與Dr.Jensen和Dr.Alfred的PCR法比較，三種方法的檢測結(jié)果的符合率高，方法一致性好，所以IRS-PCR可以用于臨床肺炎支原體肺炎的診斷。
　　 2.IRS-PCR法操作簡便，其特異性和敏感性也與上述兩種方法沒有差別，該法可以在國內(nèi)推