二甲雙胍對裸小鼠肝細胞癌移植瘤的增殖抑制作用.pdf

1、背景及目的：
　　二甲雙胍為雙胍類口服降糖藥,是一種廣泛使用的主要針對2型糖尿病治療的一線藥物。近年來研究顯示，二甲雙胍不僅有降血糖作用，還有抗腫瘤的生物效應(yīng)，并能降低腫瘤的發(fā)病率和病死率。研究已經(jīng)證明二甲雙胍能抑制結(jié)腸癌、乳腺癌、前列腺癌細胞的增殖，其重要機制之一是激活腺苷酸活化蛋白激酶（AMP-activated protein kinase，AMPK），并誘導(dǎo)細胞周期停滯。然而有關(guān)二甲雙胍對肝細胞癌細胞增殖抑制、細胞周期停滯

2、及其機制的報道不多，對裸小鼠肝細胞癌移植瘤是否具有增殖抑制作用及其機制也未見報道。我們前期的體外研究已經(jīng)發(fā)現(xiàn)二甲雙胍可以誘導(dǎo)肝細胞癌細胞株細胞周期停滯和增殖抑制，本實驗是在體外研究結(jié)果的基礎(chǔ)上，進一步對二甲雙胍對裸小鼠肝細胞癌移植瘤的增殖抑制作用及分子機制進行研究，為二甲雙胍成為抗腫瘤藥物以及臨床上預(yù)防和治療肝細胞癌提供新的理論基礎(chǔ)。
　　材料和方法：
　　1.用含10％胎牛血清、100U/ml青霉素和100U/ml鏈霉素的

3、RPMI-1640培養(yǎng)基培養(yǎng)人肝癌細胞株P(guān)LC/PRF/5細胞。
　　2.將8周齡雌性裸小鼠隨機分為2組（實驗組、對照組），實驗組用二甲雙胍工作液灌胃（160mg/Kg·d）、對照組用等體積的生理鹽水灌胃，1周后將人肝癌細胞株P(guān)LC/PRF/5細胞（1×106個/點）接種在裸小鼠皮下，建立裸小鼠肝細胞癌移植瘤動物模型。繼續(xù)灌胃7周后處死，計算成瘤率并取肝細胞癌移植瘤組織稱重、Western Blot分析及病理解析。
　　3.

4、 Western Blot檢測經(jīng)二甲雙胍干預(yù)的肝細胞癌移植瘤組織AMPK磷酸化程度。
　　4.免疫組織化學(xué)染色觀察經(jīng)二甲雙胍干預(yù)的肝細胞癌移植瘤組織 Ki-67、cyclin D1、P27kip1的表達，并應(yīng)用Leica IM50圖像采集系統(tǒng)和ImageJ軟件對免疫組織化學(xué)染色的結(jié)果進行定量分析。
　　5.觀察灌胃前后裸小鼠的體重、血糖變化。
　　6.實驗數(shù)據(jù)分析和處理：用 SPSS17.0軟件，對成瘤率使用卡方檢驗，

5、其余數(shù)據(jù)使用兩個獨立樣本的t檢驗進行統(tǒng)計學(xué)分析。
　　結(jié)果：
　　1.二甲雙胍干預(yù)的肝細胞癌移植瘤成瘤率顯著性降低。
　　2.二甲雙胍干預(yù)的肝細胞癌移植瘤平均重量顯著性降低。
　　3.二甲雙胍干預(yù)的肝細胞癌移植瘤組織中增殖活性因子Ki-67表達程度顯著性降低。
　　4.二甲雙胍干預(yù)的肝細胞癌移植瘤組織AMPK磷酸化程度顯著性增強。
　　5.二甲雙胍干預(yù)的肝細胞癌移植瘤組織cyclin D1表達顯著性降