河南省結(jié)核分枝桿菌基因分型與耐藥性和地區(qū)分布關(guān)系的研究.pdf

1、背景與目的：
　　 結(jié)核分枝桿菌(Mycobacterium tuberculosis，MTB)是影響人類健康的主要病原體之一，北京家族(Beijing family)是造成我國結(jié)核病傳播的主要基因型。特別是耐多藥北京家族基因型結(jié)核分枝桿菌菌株引起的暴發(fā)流行在歷史上曾多次發(fā)生，所以北京型菌株與耐藥之間的相關(guān)性成為了研究熱點(diǎn)。隨著分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展，建立了一些有效的分子分型方法，并應(yīng)用于結(jié)核病的分子流行病學(xué)監(jiān)測，將有助于準(zhǔn)確識別

2、結(jié)核病的爆發(fā)、流行以及制定有效的防控措施。
　　 Spoligotyping技術(shù)近年來成為進(jìn)一步檢測結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群并對其分型的首選方法。該方法的基本原理是基于直接重復(fù)區(qū)（DR區(qū)）的多態(tài)性。DR區(qū)只出現(xiàn)于結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群中，由若干個保守的長為36bp的直接重復(fù)序列組成，并被非重復(fù)序列即間隔區(qū)分開。每個間隔區(qū)序列長為34-41bp.Spoligotyping通過擴(kuò)增這些間隔區(qū)，將帶有標(biāo)記的擴(kuò)增產(chǎn)物與膜上結(jié)合的43個寡核苷酸雜交

3、，再通過增強(qiáng)化學(xué)發(fā)光法進(jìn)行檢測即可得到較為特異的結(jié)果。通常間隔區(qū)的順序在所有菌株都是相同的，但可能會發(fā)生某一間隔區(qū)的插入或缺失，因此利用Spoligotyping就可以對結(jié)核分枝桿菌進(jìn)行株水平的鑒定。
　　 應(yīng)用該技術(shù)研究河南地區(qū)結(jié)核分枝桿菌的基因型分布特征及北京家族在河南的流行情況、不同基因型的年齡分布特征以及不同地域的基因型分布特征。探討其在今后結(jié)核病控制中的應(yīng)用價值。
　　 材料和方法：
　　 應(yīng)用WHO推

4、薦的比例法對344株菌進(jìn)行異煙肼(INH)、利福平(RFP)、乙胺丁醇(EMB)、鏈霉素(SM)4種藥的藥敏試驗(yàn)。應(yīng)用spoligotyping分型技術(shù)對344株結(jié)核分枝桿菌臨床分離株進(jìn)行了基因分型。登陸http://www.miru-vntrplus.org/MIRU/index.faces網(wǎng)站對菌株基因型進(jìn)行在線分析。對病人流行病學(xué)資料如年齡、菌株來源地等與不同基因型的相關(guān)性進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)數(shù)據(jù)分析，應(yīng)用X2檢驗(yàn)，P值＜0.001認(rèn)為有統(tǒng)

5、計學(xué)意義。
　　 結(jié)果：
　　 344株菌株中，有3株經(jīng)軟件分析為未分型的菌株。其余341株結(jié)核分枝桿菌分為4個基因群（即Beijing和Beijing近似群、T群、Manu群、S和LAM3群），24個基因型。以Beijing家族基因型分布占主導(dǎo)地位，其次為T基因群(包括T1、T2、T3和T4)，而Manu2及S等基因型則所占比例很小。經(jīng)統(tǒng)計學(xué)分析，MDR耐藥在Beijing家族基因型中所占比例與非北京家族中所占比例差異

6、經(jīng)x2檢驗(yàn)無統(tǒng)計學(xué)意義(X2=1.46，p＞0.05);一線藥物任意耐藥與北京家族的聯(lián)系也未達(dá)到統(tǒng)計學(xué)的意義。河南省較年輕人群(＜25、26-40、41-60)感染的結(jié)核分枝桿菌中，北京家族基因型所占比例高于年老組（即＞60歲組），尤其以＜25歲年齡組北京家族基因型所占比例最高，達(dá)到98.7％。本次研究所選的5個地區(qū)中，北京家族基因型所占比例存在差異，經(jīng)X2檢驗(yàn)，P＜0.001，有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　 結(jié)論：
　　 1．北

7、京家族基因型在河南省占87.7％（299/341），占主導(dǎo)地位。T群占10.5％，Manu2群、S群和LAM3群等共占1.48％。
　　 2．北京家族基因型與耐藥無明顯相關(guān)性，說明Beijing家族基因型與耐藥間無相關(guān)性。
　　 3．河南省北京家族基因型的感染與年齡有相關(guān)性，較年輕人群＜25、26-40、41-60)感染的結(jié)核分枝桿菌中，北京家族基因型所占比例高于年老組（即＞60歲組），提示近期傳播的北京家族基因型在這一