脂氧素A4保護(hù)TNF--α誘導(dǎo)肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞炎癥損傷的體外實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、論文題目：月§氫丞壘堡垃! 盟E 二! 透昱照微魚(yú)笪凼廛紲照塞瘞塑魚(yú)曲鹽處塞驗(yàn)盟宜答辯委員會(huì)主席： 撿查圣答辯委員會(huì)成員： 塞亙堡旌紅旗論文答辯日期： 2 Q 1 2 生§旦2 4 目溫州睡學(xué)院頤I ：學(xué)位論文脂氧素A 4 保護(hù)T N F —f l 誘導(dǎo)肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞炎癥損傷的體外實(shí)驗(yàn)研究中文摘要目的建立重癥急性胰腺炎致急性肺損傷的體外模型，觀察脂氧素A ．( L X A ．)對(duì)T N F n 誘導(dǎo)人肺微血管內(nèi)皮細(xì)

2、胞( P M V E C s ) 炎癥損傷的保護(hù)作用。方法( 1 ) 第一階段：用不同濃度( 5 、1 0 、2 0 n g ／m 1 ) T N F —n 造成P M V E C s炎癥損傷模型，采用m T T 法檢測(cè)空白對(duì)照組及不同濃度T N F —n 組對(duì)P M V E C s 存活率的影響，咀確定T N F 一Ⅱ損傷的最適濃度。第二階段：加入不同濃度( 1 、1 0 、1 0 0 ¨g ／L ) L X A , 干預(yù)．

3、檢測(cè)T N F —d 組和不同濃度L X A ．組對(duì)p M V E C s 存活率的影響，以確定L X A ，的雖適濃度；( 2 ) 用針頭式濾器檢測(cè)T N F Ⅱ損傷前后及I 。x 軋干預(yù)后人肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞( P M V E C s ) 單層通透性的變化：( 3 ) 2 0n g ／m I T N F —n 造模2 4 h 后采用1 0 0 u g ／L L X A 。干預(yù)2 4 h ，貼壁細(xì)胞抽提總R N A ，運(yùn)用實(shí)時(shí)熒光定量P

4、 C R 方法檢測(cè)I L 一10 ，I L 一6 ，E - s e I e c t l n ．V C A M l ，M C P —l 及N F —KB p 6 5m R N A的表達(dá)情況。結(jié)果( 1 ) 隨著T N F —a 濃度的增加．用M T T 法測(cè)得吸光度逐漸降低，p M V E C s存活率顯著降低( P < O ．0 5 ) ；L X A 。呈劑量依賴(lài)性的顯著改善T N F —o 誘導(dǎo)所致下降的P M V E C s

5、存活率( P < O ．0 5 ) 。( 2 ) T N F —c i 損傷3 0 m i n ，6 0 m i n ，9 0 m l n P ～I(xiàn) V E C s單層通透系數(shù)K f 值較損傷前顯著增高( P < OO l 或P < O0 5 ) ；加入L X A ．干預(yù)時(shí)K f 值均顯著低于T N F - a 組( P < O0 1 或P < O0 5 ) 。( 3 ) 與空白對(duì)照組比較，T N F —n

6、組的I L IB ，I L 一6 ，E - s e l e c t i n ．V C A M —l ，) 4 C P - I 及N F KBp 6 5m R N A 的表達(dá)水平均有顯著升高( P < O0 1 或P < O0 5 ) ；與T N F —n 組比較，L X A ．干預(yù)組的I L 1 0 ，I L _ 6 ．Es e l e c t l n ，V C A M 一1 ，M C P —i 及N F KBp 6 5m

7、R N A 的表達(dá)水平均有顯著降低( P < O0 l 或P < O0 5 ) ；結(jié)論( 1 ) T N F —d 可以誘導(dǎo)P M V E C s 損傷．本實(shí)驗(yàn)最適濃度為2 0 n g ／m l ；L x A 。對(duì)T N F o 誘導(dǎo)的P M V E C s 損傷具有保護(hù)作用，并呈劑量依賴(lài)性，峰值濃度為1 0 0ug ／L 。( 2 ) T N F —a 可使P m V E C s 單層通透系數(shù)K f 值較損傷前顯著增高，并

8、呈時(shí)問(wèn)依賴(lài)性，本實(shí)驗(yàn)中咀9 0 m l n 最為顯著：L x ～可顯著降低T N F o 誘導(dǎo)所致的P M V E C s 單層通透系數(shù)K f 值增高。( 3 ) L X A 。對(duì)T N F a 激活人腫微血管內(nèi)皮細(xì)胞后相關(guān)炎癥因子和粘附分子m R N A 的表達(dá)具有調(diào)節(jié)作用，從而抑制炎癥反應(yīng)，減輕肺損傷。L X A 。產(chǎn)生上述作用的機(jī)制可能是抑制N F —KBp 6 5 的活化，阻斷～F _ KB信號(hào)傳導(dǎo)通路，從而抑制了I L 1 B