甲型流感病毒（H3N2）在Vero細(xì)胞上適應(yīng)性研究.pdf

1、流感病毒(influenzavirus)具有高度的傳染性，并能引起急性呼吸道疾病，它的流行特點(diǎn)是在短期內(nèi)突然發(fā)生，迅速蔓延，能造成不同程度的流行，包括世界大流行、局部流行及散發(fā)，發(fā)病率高并伴有一定的病死率。流感是一種目前人類尚不能有效控制的世界性傳染病，接種流感疫苗是預(yù)防流感病毒傳播的主要手段，目前主要使用雞胚為基質(zhì)生產(chǎn)的流感疫苗。反向遺傳學(xué)在研究流感病毒方面的突破性進(jìn)展，使得利用哺乳動(dòng)物細(xì)胞為基質(zhì)生產(chǎn)流感疫苗愈趨成熟。同時(shí)，流感也是國

2、際上第一個(gè)實(shí)現(xiàn)全球監(jiān)測的傳染病，所以能夠在適宜的培養(yǎng)條件和敏感細(xì)胞培養(yǎng)下有效地分離和鑒定流感病毒成為流感病毒的監(jiān)測和臨床快速診斷的基礎(chǔ)。此外，本論文還對流感病毒耐受超高壓力方面進(jìn)行研究。 一、流感病毒在不同細(xì)胞中適宜培養(yǎng)條件及分離的研究本實(shí)驗(yàn)采用MEK細(xì)胞、FRhK-4細(xì)胞、MDCK細(xì)胞和Vero細(xì)胞分別接種甲型流感病毒H1N1型、H3N2型和乙型流感病毒，觀察三種毒株在不同培養(yǎng)條件下的細(xì)胞病變(CPE)、血凝滴度。FRhK-4

3、細(xì)胞和MDCK細(xì)胞對流感病毒較敏感。接種流感病毒最適培養(yǎng)條件是采用濃度為1.4‰～2.8‰的NaHCO3及濃度為1.0μg/ml的TPCK-胰酶濃度的病毒維持液；并選用胞齡48h的細(xì)胞；根據(jù)得到的適宜培養(yǎng)條件和敏感細(xì)胞分離臨床樣本，在10個(gè)臨床樣本中成功分離得到兩個(gè)陽性流感病毒野毒株，并將這兩份樣本病毒分別定型為甲型流感病毒H1N1和H3N2。本試驗(yàn)結(jié)果為培養(yǎng)和分離流感病毒奠定基礎(chǔ)。 二、甲型流感病毒(H3N2)在Vero細(xì)胞上

4、適應(yīng)性研究流感病毒野毒株A/kunming/1/2005(H3N2)于33℃在Vero細(xì)胞上連續(xù)傳代25次，獲得血凝滴度為1024的Vero細(xì)胞初步適應(yīng)的毒株A/kunming/1/2005va。采用血凝試驗(yàn)、血凝抑制試驗(yàn)及RT-PCR方法進(jìn)行鑒定。同時(shí)成功地構(gòu)建真核表達(dá)載體PIVV2，為用反向遺傳學(xué)獲得Vero細(xì)胞適應(yīng)的流感病毒打下良好基礎(chǔ)。 三、超高壓力對流感病毒生物學(xué)活性的影響本試驗(yàn)研究了超高壓力對流感病毒生物學(xué)活性的影響